大鼠連蛋白ELISA試劑盒上海滬崢供應(yīng)是真正的“即用”試劑盒。不需添加試劑或進(jìn)行設(shè)置的試劑盒。我們的試劑盒——只需打開盒子，一切就緒。簡易實(shí)用的檢測方法大大的減小了出錯(cuò)機(jī)率。

試劑盒特點(diǎn)如下：

1、高效、靈敏、特異的抗體；

2、定量準(zhǔn)確穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；

3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；

5、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

酶聯(lián)免疫，ELISA試劑盒 酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)試劑盒。

酶聯(lián)免疫，ELISA試劑盒本公司售出產(chǎn)品提供售后服務(wù)，保證產(chǎn)品質(zhì)量。凡夠買我公司ELISA檢測試劑盒可免費(fèi)提供代測服務(wù)。

適用范圍：僅供科研，不得用于其他用途，禁止用于臨床

大鼠連蛋白ELISA試劑盒上海滬崢供應(yīng)組成

自備物品：

1.      酶標(biāo)儀（450nm)

2.      高精度加樣器及槍頭

3.      37℃恒溫箱

一、ELISA實(shí)驗(yàn)中血清的采集、處理和保存；

1、 真空采血針采集2ml新鮮血液，加入無菌試管中；

2、 采血后室溫靜置1小時(shí)；

3、 將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心10min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

4、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；

-20℃下，可放置保存1個(gè)月；

-70℃下，可放置保存6個(gè)月；

5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測定。 

大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的 ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。此外還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w中可能含有含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。血清標(biāo)本宜在新鮮 時(shí)檢測。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。

二、ELISA實(shí)驗(yàn)中血漿的采集、處理和保存；

1、 真空采血針采集2ml新鮮血液，加入無菌試管中；

2、 按1:9加入抗凝劑（EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉），30分鐘內(nèi)于冰上分離血漿以減少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）；

3、 將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心5min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

4、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?/span>

2-8℃下，可放置保存24-48小時(shí)；

-20℃下，可放置保存1個(gè)月；

-70℃下，可放置保存6個(gè)月；

5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測定。 請注意指標(biāo)說明書上對于抗凝血?jiǎng)┦欠裼刑厥庖?，建議使用EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。

注意事項(xiàng)：制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑EDTA,抗凝不完全的標(biāo)本因纖維蛋白原干擾而造成假陽性。

大鼠連蛋白ELISA試劑盒上海滬崢供應(yīng)操作流程：

（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 

（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 

（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 

（6）洗板，同（4）。 

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 

（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 

（9）洗板，同（4）。 

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 

（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。