【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：海豚鏈球菌(StI)熒光PCR檢測試劑盒

Name ：Streptococcus suis (StI) nucleic acid detection kit (PCR- fluorescence probe method)

【包裝規(guī)格】48T/盒

海豚鏈球菌(StI)熒光PCR檢測試劑盒【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測標本中指標的定量檢測，輔助診斷。

【試劑組成】

詳見說明書

注：

1） 不同批號試劑不能混用。

2） 試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標示的檢測次數(shù)。

【檢驗原理】

本試劑盒對指標特異核酸序列設(shè)計引物和探針，用一步法熒光RT-PCR 技術(shù)對指標 RNA 進行體外擴增檢測，用于對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

海豚鏈球菌(StI)熒光PCR檢測試劑盒【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

【標本采集】

咽拭子：應(yīng)使用與用采樣拭子，適度拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位，應(yīng)避免觸及舌 部 ； 迅 速 將 拭 子 放 入 標 本 采 集 管 中 ， 旋 緊 管 蓋 并 密 封 ， 以 防 干 燥 。

全血：疑似感染的血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，8000rpm 離心 2min，取適量上清液于 1.5mL 滅菌離心管中。痰： 以清晨的第一口痰為宜。先用清水漱口，囑患者用力咳出深部的痰于無菌樣本保存管，密封，即可送檢。

【標本采集】

病死或撲殺禽，取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織；待檢活禽，用棉拭子取分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但丌能超過 6 個月，標本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復(fù)凍融。

1.2DNA 提取

1) 對上述處理好的標本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒溫處理 10min，13,000rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.2 RNA 提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的RNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

【注意事項】

① 所有操作嚴格按照說明書進行；

②試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；

③反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

④反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

⑤使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)與用工作服；

⑥樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

⑦實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

⑧試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。 

5. 結(jié)果分析判定

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、

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