【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：新孢子蟲(Ne)熒光PCR檢測試劑盒

【包裝規(guī)格】48T/盒

Name ：New nucleic acid detection kit for new sporozoite (Ne) (PCR- fluorescent probe)

新孢子蟲(Ne)熒光PCR檢測試劑盒【預(yù)期用途】試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21uL/管。

加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）

NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。

推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

結(jié)果分析判定

結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。

結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)明顯擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和明顯擴(kuò)增曲線者為陽性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴(kuò)增曲線。

檢測方法的局限性

樣本檢測結(jié)果不樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果。

質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

【參考文獻(xiàn)】

國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.SN/T 1280-2003 國境口岸檢驗(yàn)規(guī)程[S].北京:科學(xué)出版社, 2003.

張志凱, 海榮, 蔡虹, 等. 耶爾森菌的多重 PCR 檢測方法[J]. 中國媒介生物學(xué)及控制雜志, 2007.

吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局. DB22/T 2081-2014 耶爾森菌核酸的測定-熒光PCR 方法[S].

新孢子蟲(Ne)熒光PCR檢測試劑盒【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標(biāo)本采集】

患病動物：腺、肝、脾、肺組織、糞便、血液人：痰；尿液、血液

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【產(chǎn)品圖片】

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：上海烜雅生物科技有限公司

生產(chǎn)地址：金海公路3265號14幢11546室 

上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的新孢子蟲(Ne)熒光PCR檢測試劑盒供應(yīng)質(zhì)量高，價格低，售后有保證。為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。

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本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷。

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