【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：肺炎鏈球菌(SP)熒光PCR檢測試劑盒

Name ：Streptococcus pneumoniae (SP) nucleic acid detection kit (PCR- fluorescence probe method)

【包裝規(guī)格】48T/盒

肺炎鏈球菌(SP)熒光PCR檢測試劑盒【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測標(biāo)本中指標(biāo)的定量檢測，輔助診斷。

【試劑組成】

名 稱	規(guī) 格
酶液	50μL×1 管
反應(yīng)液	1.0mL×1 管
陽性質(zhì)控品	50μL ×1 管
陰性質(zhì)控品	250μL ×1 管
核酸提取液	1.5ml×2管

詳見說明書

注：

1） 不同批號試劑不能混用。

2） 試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測次數(shù)。

【檢驗原理】

本試劑盒對指標(biāo)特異核酸序列設(shè)計引物和探針，用一步法熒光RT-PCR 技術(shù)對指標(biāo) RNA 進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

肺炎鏈球菌(SP)熒光PCR檢測試劑盒【使用方法】

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	反應(yīng)液	酶液
用量	20μL	1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟	循環(huán)數(shù)	溫度	時間	收集熒光信號
1	1 cycle	42℃	20min	否
2	1 cycle	95℃	10min	否
3	40 cycles	94℃	15sec	否
		55℃	30sec	是

5. 結(jié)果分析判定

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、

stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。

5.2 結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且有明顯的擴增曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)明顯曲線的樣本建議重復(fù)試驗，重復(fù)試驗結(jié)果如果同樣出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和明顯擴增曲線則為陽性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。

6. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無明顯擴增曲線且無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。

7. 檢測方法的局限性

① 樣本檢測結(jié)果不樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

②樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

③陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

④病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

⑤不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

⑥試劑運輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；

肺炎鏈球菌(SP)熒光PCR檢測試劑盒【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標(biāo)本采集】

病死或撲殺動物，取水泡皮及水泡液；待檢活動物，取 O/P 液 2~3mL。

【保存和運輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標(biāo)本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【產(chǎn)品圖片】

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：上海烜雅生物科技有限公司

生產(chǎn)地址：金海公路3265號14幢11546室

上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的肺炎鏈球菌(SP)熒光PCR檢測試劑盒質(zhì)量高，價格低，售后有保證。為您的實驗保駕護航。

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本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷。

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