【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）熒光PCR檢測(cè)試劑盒

Name ：Respiratory syncytial virus type A (RSV-A) nucleic acid detection kit (RT-PCR fluorescent probe method)

【包裝規(guī)格】48T/盒

呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）熒光PCR檢測(cè)試劑盒【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)動(dòng)物腺、肝、脾、肺組織及人痰、血液等標(biāo)本中分離出的指標(biāo)，用于指標(biāo)的定量檢測(cè)輔助診斷。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采對(duì)指標(biāo)基因設(shè)計(jì)特異性的引物和探針，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)指標(biāo)的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

名 稱	規(guī) 格
核酸提取液	1.5mL×2 管
酶液	50μL×1 管
反應(yīng)液	1.0mL×1 管
陽(yáng)性質(zhì)控品	50μL×1 管
陰性質(zhì)控品	250μL×1 管

呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）熒光PCR檢測(cè)試劑盒【使用方法】

1.1樣本前處理

固體樣本：手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；液體樣本：直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；

腦脊液直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；

血液樣本：取抗凝血下層血細(xì)胞 50μL，加入 100μL 雙蒸水吹勻。

DNA 提取

對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒溫處理 10min，13,000rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	反應(yīng)液	酶液
用量（樣本數(shù)為 N）	20μL	1μL

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21uL/管。

加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）

NONE，請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光。

推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟	循環(huán)數(shù)	溫度	時(shí)間	收集熒光信號(hào)
1	1 cycle	95℃	10min	否
2	40 cycles	94℃	15sec	否
		55℃	30sec	是

檢測(cè)方法的局限性

樣本檢測(cè)結(jié)果不樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；

陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；

病原體在流行過程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果。

質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無(wú)明顯擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）熒光PCR檢測(cè)試劑盒【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】

患病動(dòng)物：腺、肝、脾、肺組織、糞便、血液人：痰；尿液、血液

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【產(chǎn)品圖片】

【參考文獻(xiàn)】

國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.SN/T 1280-2003 國(guó)境口岸鼠疫檢驗(yàn)規(guī)程[S].北京:科學(xué)出版社, 2003.

張志凱, 海榮, 蔡虹, 等. 鼠疫耶爾森菌的多重 PCR 檢測(cè)方法[J]. 中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志, 2007.

吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局. DB22/T 2081-2014 鼠疫耶爾森菌核酸的測(cè)定-熒光PCR 方法[S].

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：上海烜雅生物科技有限公司

生產(chǎn)地址：金海公路3265號(hào)14幢11546室

上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）熒光PCR檢測(cè)試劑盒質(zhì)量高，價(jià)格低，售后有保證。為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。

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本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷。

呼-吸道合胞病毒A 型（RSV-A）熒光PCR檢測(cè)試劑盒 產(chǎn)品：

轉(zhuǎn)基因    XY-TG-D-1241    轉(zhuǎn)基因熒光PCR試劑盒

多重-動(dòng)物    XY-MQ-D-1242     馬梨形蟲病(Piroplasmosis)核-酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)

多重-動(dòng)物    XY-MQ-D-1243    豬鏈球菌2型/副豬嗜血桿菌/傳染性胸膜肺炎放線桿菌（SS-2/HPS/APP）核-酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)

多重-動(dòng)物    XY-MQ-D-1244    甲型流感病毒H1N1亞型(IAV-H1N1)核-酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR熒光探針法)

多重-動(dòng)物    XY-MQ-D-1245 禽流感病毒H5N1亞型(AIV-H5N1)核-酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR熒光探針法)

多重-動(dòng)物    XY-MQ-D-1246 禽流感病毒H5N6亞型(AIV-H5N6)核-酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR熒光探針法)

多重-動(dòng)物    XY-MQ-D-1247 禽流感病毒H7N9亞型(AIV-H7N9)核-酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR熒光探針法)

多重-動(dòng)物    XY-MQ-D-1248 禽流感/新城疫病毒(AIV/NDV)核-酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR熒光探針法)

多重-動(dòng)物    XY-MQ-D-1249 禽流感通用/H5亞型（AIV-U/AIV-H5）核-酸檢測(cè)試劑盒 (RT-PCR熒光探針法)

多重-動(dòng)物    XY-MQ-D-1250 禽流感病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)核-酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR熒光探針法)

鴨白介素2(IL-2)ELISA試劑盒

鴨子碳酸酐酶(CA)ELISA試劑盒

鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒

鴨環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒

鴨免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒

鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒

鴨病毒性腸炎病毒(DEV)ELISA試劑盒

鴨白介素6(IL-6)ELISA試劑盒

鴨白介素1(IL-1)ELISA試劑盒

鴨γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒

綿羊磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒

綿羊白介素2(IL-2)ELISA試劑盒

綿羊主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒

綿羊白介素6(IL-6)ELISA試劑盒

綿羊白介素1β(IL-1β)ELI