【中文名稱】動(dòng)物源性成分熒光PCR試劑盒廠家

【英文名稱】Fluorescent qualitative PCR kit for animal diseases

【產(chǎn)品及特點(diǎn)】

動(dòng)物源性成分熒光PCR試劑盒廠家是基于熒光染料檢測(cè)的即用型 PCR 試劑盒，可以對(duì)靶片段進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR 分析（quantitative PCR、qPCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及新型熒光染料 DNAgreen 等所有實(shí)時(shí)定量 PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR 反應(yīng)和 HRM 分析，具有廣泛的用途。

1. 方便，用戶只需準(zhǔn)備模板和引物既可以進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR 實(shí)驗(yàn)和 HRM（High Resolution DNA Melt Curve Analysis）分析。而基于 SYBR Green I 和 LC Green 染料的 qPCR mix 則不能同時(shí)用于上述兩種實(shí)驗(yàn)。

2. 使用第三代飽和型熒光染料，信號(hào)強(qiáng)，不會(huì)抑制 PCR 反應(yīng)。

3. 快捷，即用型的預(yù)配液使加樣操作步驟大大簡化，避免了交叉污染，降低實(shí)驗(yàn)誤差。

4. 各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強(qiáng)。能檢測(cè)到濃度為 50 拷貝/mL 的靶分子。

動(dòng)物源性成分熒光PCR試劑盒廠家【規(guī)格及成分】

成分	100次熱封袋包裝
qPCR MagicMix，2×	1 mL
專一性引物對(duì)	200 μL
陽性對(duì)照	50 μL
超純水	1 mL
使用手冊(cè)	1 份

動(dòng)物源性成分熒光PCR試劑盒廠家【運(yùn)輸及保存】

低溫運(yùn)輸，-20℃保存, 保存期限為 6 個(gè)月。

【產(chǎn)品圖片】

 

【自備試劑】

DNA 模板、引物、超純水。

【使用方法】

1. 以 20 uL 的 qPCR 反應(yīng)體系為例：在一干凈的 PCR 管中，加入下列成分：

反應(yīng)體系成分	20 uL 體系	終濃度
qPCR MagicMix，2×	10 uL	1×
自備引物一 a	x uL	0.1-0.5 uM
自備引物二 a	x uL	0.1-0.5 uM
自備模板 a	x uL
自備 ROXb	2 uL	（可以不加）
補(bǔ)超純水到	20 uL

放入熒光 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增, 并在退火或延長步驟中記錄熒光信號(hào)。

注意：

a) 通常引物濃度以 0.2 μM 可得到較好結(jié)果，可以終濃度 0.1-1.0 μM 作為設(shè)定范圍的參考；通常 DNA模板的量以10-100 ng基因組 DNA或1-10 ng cDNA為參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數(shù)不同，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定*的模板使用量。

b) ROX 校正染料：如果使用 ABI 公司的 7500，7700 和 7900 三種型號(hào)的熒光 PCR 儀器，則需用自備的 ROX 進(jìn)行 Ct 值校正。對(duì) ABI 7700 和 7900，ROX 的*濃度為 1×（即在每 20 uL 反應(yīng)體系中加 2 uL 10×ROX）。對(duì)ABI 7500， ROX 的*濃度為 0.05-0.1×（每 20 uL 反應(yīng)體系加 0.1-0.2uL 10×ROX；也可將 10×ROX 稀釋到 1×，然后每個(gè)反應(yīng)體系加入 1-2 uL1×ROX）。ROX 會(huì)在溶解曲線中產(chǎn)生噪音，因此，如果出現(xiàn)了雜峰，將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項(xiàng)取消打勾，然后重新分析數(shù)據(jù)。

對(duì)于 iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000, RotorGene3000，RotorGene 6000 和 LightCycler 480 等型號(hào)的熒光PCR 儀器，ROX 不是必須的，但加入的話也不會(huì)影響整個(gè) PCR 分析。

2. 循環(huán)步驟：根據(jù)擴(kuò)增子的性質(zhì)和儀器性能，從以下三個(gè)過程中任選一個(gè)進(jìn)行擴(kuò)增。

 

A：兩步快速循環(huán)法：適用于引物 Tm 值設(shè)計(jì)為 60℃的反應(yīng)

酶活化	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
酶活化	95℃	10 min	1
變性 退火&延伸	95℃ 60℃	15 s 1 min	35-40

注意：本產(chǎn)品所采用的熱啟動(dòng)酶須在預(yù)變性 95℃、10 min 條件下實(shí)現(xiàn)酶的活化。

退火溫度請(qǐng)以 60-64℃作為設(shè)定范圍的參考，發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可提高退火溫度。

 

B：三步快速循環(huán)法：適用于延伸步驟溫度高于退火步驟的 PCR（長引物 PCR）

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
酶活化	95℃	10 min	1
變性 退火 延伸	95℃ 56-64℃ 72℃	10 s 30 s 32 s	35-40

動(dòng)物源性成分熒光PCR試劑盒廠家注意：

a) 退火溫度：建議采用兩步法 PCR，退火溫度 60℃進(jìn)行反應(yīng)。若提高反應(yīng)特異性，可提高退火溫度，以 60-64℃作為設(shè)定范圍的參考。若因使用 Tm 值較低的引物等原 因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，可嘗試進(jìn)行三步法 PCR 擴(kuò)增，三步法的退火溫度請(qǐng)以 56℃-64℃的范圍作為設(shè)定參考。延伸溫度：延伸溫度設(shè)為 72℃通?？梢蕴岣邤U(kuò)增效率。但是，對(duì)于 AT 含量大于 70%的擴(kuò)增子來說，延伸溫度設(shè)為 60℃為宜。

 

C：通用循環(huán)法：這種循環(huán)方法適用于幾乎所有的熒光 PCR 儀，也適用于用快速循環(huán)法不能擴(kuò)增的模版。

酶活化	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
酶活化	95℃	10 min	1
變性 退火&延伸	95℃ 60℃	15 s 60 s	35-40

3. 數(shù)據(jù)采集

具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在沒結(jié)合 DNA 時(shí)，*吸收光譜在 471nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的*吸收光譜在 500nm，*發(fā)射光譜在530nm。

其他注意事項(xiàng)：

1. 如果使用 iCycler，可以不加入 FAM。

2. 如果使用Roche LightCycler的玻璃毛細(xì)管進(jìn)行PCR，需加入終濃度為0.5mg/mL的自備 BSA。

動(dòng)物源性成分熒光PCR試劑盒廠家關(guān)聯(lián)產(chǎn)品：

動(dòng)物源性成分    XY-SG-D-1211    犬源性成分(Canine)核酸檢測(cè)試劑盒(P