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異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷
參數(shù)	數(shù)值
概述	異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。IPTG 常用于需要誘導(dǎo) β-半乳糖苷酶活性的克隆實(shí)驗(yàn)。它常與 X-Gal 或 Bluo-Gal 結(jié)合使用，用于重組細(xì)菌菌落的藍(lán)白篩選，這些菌落可以誘導(dǎo) lac 操縱子在大腸桿菌中的表達(dá)。IPTG 與 lacI 阻遏蛋白結(jié)合并改變其構(gòu)象而發(fā)揮作用，防止 β-半乳糖苷酶編碼基因 lacZ 的抑制。
誘導(dǎo)原理	E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙?；D(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O、一個(gè)啟動(dòng)序列P及一個(gè)調(diào)節(jié) 基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，使操縱子（元）受阻遏而處于關(guān)閉狀態(tài)。在啟動(dòng)序列P上游還有一個(gè)分解（代謝）物基因激 活蛋白（CAP）結(jié)合位點(diǎn)。由P序列、O序列和CAP結(jié)合位點(diǎn)共同構(gòu)成lac操縱子的調(diào)控區(qū)，三個(gè)酶的編碼基因即由同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié)，實(shí)現(xiàn)基因產(chǎn)物的協(xié)調(diào)表達(dá) 。 在沒有乳糖存在時(shí)，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài)。此時(shí)，I序列在PI啟動(dòng)序列操縱下表達(dá)的Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié) 合，抑制轉(zhuǎn)錄起動(dòng)。當(dāng)有乳糖存在時(shí)，lac操縱子（元）即可被誘導(dǎo)。在這個(gè)操縱子（元）體系中，真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)楫惾樘?。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用與異乳糖相同，是一 種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。
IPTG的優(yōu)點(diǎn)	1.能誘導(dǎo)酶的合成，但又不被分解的分子，稱為安慰誘導(dǎo)物。由于乳糖雖可誘導(dǎo)酶的合成，但又隨之分解，產(chǎn)生很多復(fù)雜的動(dòng)力學(xué)問題，因此人們常用安慰誘導(dǎo)物來進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)。 2.IPTG不被菌體代謝，為乳糖類似物，一旦進(jìn)入細(xì)胞就會(huì)產(chǎn)生持續(xù)長(zhǎng)久的誘導(dǎo)效果，所以IPTG的誘導(dǎo)效率高，往往只需要很少量(1mmol/L)即可達(dá)到理想誘導(dǎo)效果。由于IPTG不被代謝，在胞內(nèi)專一誘導(dǎo)外源蛋白的表達(dá)。不受細(xì)胞代謝的影響，誘導(dǎo)效果持續(xù)穩(wěn)定。乳糖有雙效作用，既能做為誘導(dǎo)劑異乳糖的前體物質(zhì)，又可以做碳源，在誘導(dǎo)過程中，很不穩(wěn)定，IPTG因其優(yōu)異的穩(wěn)定性決定了它適合做實(shí)驗(yàn)研究用。 3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。 4.半乳糖苷鍵中用硫代替了氧，失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物與酶位點(diǎn)的親和力相同，IPTG雖不為β–半乳糖苷酶所識(shí)別，但它是lac基因簇十分有效的誘導(dǎo)物。 使用方法：首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液，并進(jìn)行過濾除菌后保存。然后在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml)，制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。當(dāng)dna片段插入至pUC系列載體(或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體)，然后轉(zhuǎn)化至lacZ缺失細(xì)胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長(zhǎng)出菌體的藍(lán)白色，而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。
實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備	1、誘導(dǎo)表達(dá)材料： ( 1 ) LB (Luria—Bertani))培養(yǎng)基： 酵母膏 (Yeast extract) 5g 蛋白胨 (Peptone) 10g NaCl 10g 瓊脂 (Agar) 1-2% 蒸餾水 (Distilled water) 1000ml pH 7.0 適用范圍：大腸桿菌 ( 2 ) IPTG 貯備液： 2 g IPTG溶于10 mL 蒸餾水中,0 . 22 μm 濾膜過濾除菌,分裝成1 mL /份,-20 ℃ 保存. ( 3 ) l× 凝膠電泳加樣緩沖液： 50 mmol / L Tris -CI ( pH 6 . 8 ) 50 mmol / L DTT 2 % SDS (電泳級(jí)) 0.1 % 溴酚藍(lán) 10 % 甘油 2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白純化材料： 1 )酶溶法 (1)裂解緩沖液： 50 mmol / L Tris-CI ( pH 8 . 0 ) 1 mmol / L EDTA 100 mmol / LNaCI (2)50 mmol / L 苯甲基磺酰氟(PMSF ). (3)10 mg / mL 溶菌酶. (4)脫氧膽酸. (5)1 mg / mL DNase I. 2 )超聲破碎法 ( 1 ) TE 緩沖液. ( 2 ) 2×SDS -PAGE 凝膠電泳加樣緩沖液： 100 mmol / L Tris-HCI ( pH 8 . 0 ) 100 mmol / L DTT 4 %SDS 0.2 % 溴酚藍(lán) 20 % 甘油
實(shí)驗(yàn)方案	1、外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)： (1)用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切核酸酶消化載體DNA 和目的基因. ( 2 )按連接步驟連接目的基因和載體,并轉(zhuǎn)化到相應(yīng)的宿主菌. ( 3 )篩選出含重組子的轉(zhuǎn)化菌落,提取質(zhì)粒DNA 作限制性內(nèi)切核酸酶圖譜,DNA 序列測(cè)定, 確定無誤后進(jìn)行下一步. ( 4 )如果表達(dá)載體的原核啟動(dòng)子為PL 啟動(dòng)子,則在30 -32 ℃ 培養(yǎng)數(shù)小時(shí),使培養(yǎng)液的OD600達(dá)0.4-0.6 ,迅速使溫度升至42 ℃ 繼續(xù)培養(yǎng)3 -5h ;如果表達(dá)載體的原核啟動(dòng)子為tac 等,則37 ℃培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)小時(shí)達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后加IPTG 至終濃度為1 mmol / L.繼續(xù)培養(yǎng)3 -5h . ( 5 )取上述培養(yǎng)液1 mL , 1000g 離心,1 min ,沉淀,加100 μL 聚丙烯酰胺凝膠電泳上樣緩沖液后,作SDS -PAGE 檢測(cè). 2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白質(zhì)純化： 細(xì)菌的裂解 常用方法有：① 高溫珠磨法;② 高壓勻漿;③ 超聲破碎法;④ 酶溶法;⑤ 化學(xué)滲透等.前三種方法屬機(jī)械破碎法,并且方法① 、② 已在工業(yè)生產(chǎn)中得到應(yīng)用,后三種方法在實(shí)驗(yàn)室研究中應(yīng)用較為廣泛.下面介紹酶溶法和超聲破碎法的實(shí)驗(yàn)步驟. 酶溶法.常用的溶解酶有溶菌酶;β-1,3 -葡聚糖酶;β-1,6 -葡聚糖酶;蛋白酶;殼多糖酶;糖昔酶等.溶菌酶主要對(duì)細(xì)菌類有作用,而其他幾種酶對(duì)酵母作用顯著.主要步驟為： 4 ℃ ,5000rpm 離心,15 min ,收集誘導(dǎo)表達(dá)的細(xì)菌培養(yǎng)液(100 mL ).棄上清,約每克濕菌加3 mL 裂解緩沖液,懸浮沉淀.
用途	常用分子生物學(xué)試劑，常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等
用途	是β-半乳糖苷酶和β-半乳糖透酶的誘導(dǎo)劑，不被β-半乳糖苷水解，是硫代半乳糖轉(zhuǎn)酰酶的底物
用途	IPTG 常用于需要誘導(dǎo) β-半乳糖苷酶活性的克隆實(shí)驗(yàn)。它常與 X-Gal 或 Bluo-Gal 結(jié)合使用，用于重組細(xì)菌菌落的藍(lán)白篩選，這些菌落可以誘導(dǎo) lac 操縱子在大腸桿菌中的表達(dá)。IPTG 與 lacI 阻遏蛋白結(jié)合并改變其構(gòu)象而發(fā)揮作用，防止 β-半乳糖苷酶編碼基因 lacZ 的抑制。
別名	異丙基-Β-D-硫代半乳吡喃糖苷;IPTG 高純;IPTG, 非動(dòng)物源;異丙基-Β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG);異丙基-Β-D-硫代半乳糖苷(異丙基-Β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷);異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖甙;異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷;異丙基-beta-D-硫代半乳糖苷
英文別名	367-93-1;IPTG, Animal-Free, High Purity - CAS 367-93-1 - Calbiochem;100 mM IPTG Solution - Novagen;IPTG, Dioxane-Free, High Purity - CAS 367-93-1 - Calbiochem;IPTG, Hemidioxane Adduct - CAS 367-93-1 - Calbiochem;IPTG ULTRA PURE;IPTG, NAO;POLYETYLENE GLYCOL 6000 MOL. BIOLOGY GRA

異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷
參數(shù)	數(shù)值
熔點(diǎn)	105 °C
比旋光度	-31 º (c=1, water)
沸點(diǎn)	350.9°C (rough estimate)
密度	1.3329 (rough estimate)
折射率	1.5060 (estimate)
儲(chǔ)存條件	−20°C
形態(tài)	Crystalline Powder
顏色	White
水溶解性	soluble
Merck	14,5082
BRN	4631
穩(wěn)定性	Stable. Incompatible with strong oxidizing agents.
InChIKey	BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N
CAS 數(shù)據(jù)庫	367-93-1(CAS DataBase Reference)
EPA化學(xué)物質(zhì)信息	.beta.-D-Galactopyranoside, 1-methylethyl 1-thio-(367-93-1)

異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷
參數(shù)	數(shù)值
危險(xiǎn)品標(biāo)志	Xn,Xi
危險(xiǎn)類別碼	19-40-66-36/37/38
安全說明	23-24/25-36/37-22-36/37/39-27-26
WGK Germany	3
F	10
TSCA	Yes
海關(guān)編碼	29389090

供應(yīng) 367-93-1 | 供應(yīng) 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 | 現(xiàn)貨 367-93-1 | 現(xiàn)貨 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 | 高純 367-93-1 | 高純 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 | 定制 367-93-1 | 定制 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 | 367-93-1 供應(yīng)商 | 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 供應(yīng)商 | 367-93-1 生產(chǎn)廠家 | 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 生產(chǎn)廠家 | 367-93-1 價(jià)格 | 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 價(jià)格 | 367-93-1 現(xiàn)貨 | 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 現(xiàn)貨 | 367-93-1 作用 | 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 作用 | 367-93-1 原料 | 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 原料 | 367-93-1 定制 | 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 定制 | 367-93-1 試劑 | 異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 試劑 |