實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

技術(shù)原理:

DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

使用及效果：

將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

丙酮中丙線磷（滅線磷、滅克磷）溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Anaplasma phagocytophilum嗜吞噬細(xì)胞無漿體(無形體)PCR試劑盒

丙酮中特丁硫磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Anaplasma phagocytophilum嗜吞噬細(xì)胞無漿體(無形體)染料法熒光定量PCR試劑盒

固體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 5g Anaplasma phagocytophilum嗜吞噬細(xì)胞無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒

固體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 5g Anaplasma spp.無漿體(無形體)通用PCR試劑盒

固體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 5g Anaplasma spp.無漿體(無形體)通用染料法熒光定量PCR試劑盒

一水合乳糖水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 5g Anaplasma spp.無漿體(無形體)通用探針法熒光定量PCR試劑盒

一水合檸檬酸鉀水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 5g Ancylostoma duodenale十二指腸鉤口線蟲PCR試劑盒

二水合酒石酸鈉水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 5g Ancylostoma duodenale十二指腸鉤口線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒

L-精氨酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 100mg Ancylostoma duodenale十二指腸鉤口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

L-異亮氨酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 100mg Anisakis spp.異尖線蟲屬PCR試劑盒

L-亮氨酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 100mg Anisakis spp.異尖線蟲屬染料法熒光定量PCR試劑盒

L-纈氨酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 100mg Anisakis spp.異尖線蟲屬探針法熒光定量PCR試劑盒

L-苯丙氨酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 100mg Aphanomyces astaci變形絲囊霉菌PCR試劑盒

L-賴氨酸單鹽酸鹽純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 100mg Aphanomyces astaci變形絲囊霉菌染料法熒光定量PCR試劑盒

正己烷中氧氯丹溶液標(biāo)準(zhǔn)樣品 1ml Aphanomyces astaci變形絲囊霉菌探針法熒光定量PCR試劑盒
明黨參LAMP鑒定試劑盒圖片7-羥基-4-甲基香豆素/4-甲基傘形酮/羥甲香豆素/膽通/4-甲基傘形花內(nèi)酯/β-甲基傘形花精/β-甲基傘形花內(nèi)酯/4-MUBR，98%25克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，90-33-5RT

100克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，

500克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，

中文名稱： 7-羥基-4-甲基香豆素

其他名稱： 4-甲基傘形酮；羥甲香豆素；膽通；4-甲基傘形花內(nèi)酯；β-甲基傘形花精；β-甲基傘形花內(nèi)酯

英文名稱： 4-MU

其他名稱： 4-Methylumbelliferon；4-Methyl-7-hydroxycoumarin；7-Hydroxy-4-methylcoumarin；beta-Methylumbelliferone；Hymecromone；Coumarin 4

產(chǎn)品規(guī)格： BR，98%

包 裝： 25克/100克/500克

CAS號：90-33-5

C10H8O3=176.17

級別：BR

含量：≥97.0%(HPLC)

熔點(diǎn)：186～191℃

水分：≤2.5%

性狀：類黃色結(jié)晶。微溶于水，溶于濃硫酸溶液，部分溶于5%的Na2CO3溶液，部分溶于乙醇和異丙醇。與濃硫酸作用呈藍(lán)色熒光

用途：生化研究。適用于做激光染料，熒光測定酶活性的標(biāo)準(zhǔn)。測定硝酸的指示劑

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