上海康朗生物科技有限公司
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主營產(chǎn)品: 生化試劑, 標(biāo)準(zhǔn)品, ELISA試劑盒, 化學(xué)試劑, 分析試劑
熱帶PCR試劑盒-PCR定量檢測
價(jià)格
訂貨量(盒)
¥1490.00
≥1
¥1290.00
≥5
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主營產(chǎn)品
熱帶念珠菌PCR試劑盒PCR定量檢測
特別提示:包括熱帶念珠菌PCR試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:熱帶念珠菌PCR試劑盒
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品名稱 | 方法 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
熱帶念珠菌LAMP試劑盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
熱帶念珠菌PCR試劑盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
熱帶念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
熱帶念珠菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 探針法 | 50次 | 3490元 |
熱帶念珠菌PCR試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn):
因此快速靈敏檢測熱帶念珠菌具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增熱帶念珠菌,與其他植物沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
熱帶念珠菌PCR試劑盒規(guī)格及成分:
成分 | 編號 | 十孔盒包裝 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 | 1 mL(紅蓋) |
超純水 | 2 | 1 mL(亮黃色) |
熱帶念珠菌 PCR 引物混合液 | 3 | 100 μL(白蓋) |
熱帶念珠菌 PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) | 4 | 50 μL(黃蓋) |
核酸釋放劑(試用裝) | 5 | 20 次(1 mL,綠蓋) |
使用手冊 | 6 | 1 份 |
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。
自備試劑:樣品 DNA。
熱帶念珠菌PCR試劑盒使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈送20 次核酸釋放劑試用裝,其使用手冊可以從本公司網(wǎng)站訂購核酸釋放劑。
2. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要做 N+2 個(gè)提取,包括一個(gè)樣品制備陽性對照和一個(gè)樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL 熱帶念珠菌 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)
3. 對 N+2 個(gè)樣品,在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對照和一個(gè) PCR 陰性對照,故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分:
成分 | N+2 個(gè)樣品管 | PCR 陰性對照 | PCR 陽性對照 |
PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
熱帶念珠菌PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板 | 各 18 μL | -- | -- |
PCR 陰性對照(水) | -- | 18 μL | -- |
PCR 陽性對照(熱帶念珠菌 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液) | -- | -- | 18 μL |
4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng):
過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反應(yīng)(35 個(gè)循環(huán)) | 95℃ | 15 sec |
57℃ | 15 sec | |
72℃ | 40 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、電泳檢測
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn),陰性對照必須無任何擴(kuò)增,否則實(shí)驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
PCR常見問題的常見原因
1. cDNA產(chǎn)量的很低可能的原因:
1) RNA模板質(zhì)量低
2) 對mRNA濃度估計(jì)過高
3) 反應(yīng)體系中存在反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或反轉(zhuǎn)錄酶量不足
4) 同位素磷32過期
5) 反應(yīng)體積過大,不應(yīng)超過50μl
2. 擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳分析時(shí)沒有條帶或條帶很淺
1) 最常見的原因在于您的反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系
3) 與反應(yīng)起始時(shí)RNA的總量及純度有關(guān)
4) 建議在試驗(yàn)中加入對照RNA
5) 第一鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí),在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過1/10
6) 建議用Oligo(dT)或隨機(jī)引物代替基因特異性引物(GSP)用于第一鏈合成。由于RNA模板存在二級結(jié)構(gòu),如環(huán)狀結(jié)果,有可能導(dǎo)致GSP無法與模板退火;或SSⅡ反轉(zhuǎn)錄酶無法從此引物進(jìn)行有效延伸。
7) 目的mRNA中含有強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄中止位點(diǎn),可以試用以下方法解決:
a. 將第一鏈的反應(yīng)溫度提高至50℃。
b. 使用隨機(jī)六聚體代替Oligo(dT)進(jìn)行第一鏈反應(yīng)。
3. 產(chǎn)生非特異性條帶
1) 用RT陰性對照檢測是否被基因組DNA污染。如果RT陰性對照的PCR結(jié)果也顯示同樣條帶,則需要用DNase I重新處理樣品。
2) 在PCR反應(yīng)中,非特異的起始擴(kuò)增將導(dǎo)致產(chǎn)生非特異性結(jié)果。在低于引物Tm 2至5℃的溫度下進(jìn)行退火,降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結(jié)果的產(chǎn)生。
3) 由于mRNA剪切方式的不同,根據(jù)選擇引物的不同將導(dǎo)致產(chǎn)生不同的RT-PCR結(jié)果。
4. 產(chǎn)生彌散(smear)條帶
1) 在PCR反應(yīng)體系中第一鏈產(chǎn)物的含量過高
2) 減少引物的用量
3) 優(yōu)化PCR反應(yīng)條件/減少PCR的循環(huán)次數(shù)
4) 在用DNase處理被DNA污染的RNA樣品時(shí),其產(chǎn)生的寡核苷酸片段會產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增,一般會顯示為彌散背景。
5. 產(chǎn)生大分子量的彌散條帶
1) 大多數(shù)情況下是由于退火溫度過低而導(dǎo)致的非特異性的起始及延伸產(chǎn)生的
2) 對于長片段的PCR,建議將反應(yīng)體系中cDNA的濃度稀釋至1:10(或1:100-1:200)
6. 在無反轉(zhuǎn)錄酶的情況下,對照RNA獲得擴(kuò)增結(jié)果
采購數(shù)量不能為空
聯(lián)系信息不能為空
驗(yàn)證碼不正確