熱帶PCR試劑盒 PCR定量檢測
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熱帶PCR試劑盒 PCR定量檢測
熱帶PCR試劑盒 PCR定量檢測
熱帶PCR試劑盒 PCR定量檢測

熱帶PCR試劑盒-PCR定量檢測

價(jià)格

訂貨量(盒)

¥1490.00

≥1

¥1290.00

≥5

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上海康朗生物科技有限公司

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商品參數(shù)
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商品介紹
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聯(lián)系方式
品牌 康朗生物/KALANG
主要組成成分 PCR MagicMix 3.0, 超純水, PCR 引物混合液,PCR 陽性對照,核酸釋放劑,說明書
貨號 KL-13-60240
性狀 水劑
規(guī)格 50T
貯藏 -20℃保存
有效期 一年
貨期 現(xiàn)貨
價(jià)格 1490
產(chǎn)品及特點(diǎn) 具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、省時(shí)等特點(diǎn)。
商品介紹

熱帶念珠菌PCR試劑盒PCR定量檢測

 

特別提示:包括熱帶念珠菌PCR試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

 

產(chǎn)品名稱:熱帶念珠菌PCR試劑盒

英文名稱:Candida tropicalis

產(chǎn)品規(guī)格:50

產(chǎn)品保存:-20℃保存

產(chǎn)品有效期:一年

儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。

運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。

產(chǎn)品名稱

方法

規(guī)格

價(jià)格

熱帶念珠菌LAMP試劑盒

LAMP

50

2490

熱帶念珠菌PCR試劑盒

PCR

50

1490

熱帶念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒

染料法

50

2490

熱帶念珠菌探針法熒光定量PCR試劑盒

探針法

50

3490

 

 

熱帶念珠菌PCR試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn): 

因此快速靈敏檢測熱帶念珠菌具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):

1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增熱帶念珠菌,與其他植物沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。

熱帶念珠菌PCR試劑盒規(guī)格及成分:

成分

編號

十孔盒包裝

PCR MagicMix 3.0

1

1 mL(紅蓋)

超純水

2

1 mL(亮黃色)

熱帶念珠菌 PCR 引物混合液

3

100 μL(白蓋)

熱帶念珠菌 PCR 陽性對照

1×10E8 拷貝/μL

4

50 μL(黃蓋)

核酸釋放劑(試用裝)

5

20 次(1 mL,綠蓋)

使用手冊

6

1

運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA。

熱帶念珠菌PCR試劑盒使用方法

 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈送20 次核酸釋放劑試用裝,其使用手冊可以從本公司網(wǎng)站訂購核酸釋放劑。

2. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要做 N+2 個(gè)提取,包括一個(gè)樣品制備陽性對照和一個(gè)樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL 熱帶念珠菌 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)

3. N+2 個(gè)樣品,在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對照和一個(gè) PCR 陰性對照,故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分:

成分

N+2 個(gè)樣品管

PCR 陰性對照

PCR 陽性對照

PCR MagicMix 3.0

20 μL

20 μL

20 μL

熱帶念珠菌PCR引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 個(gè)樣品 DNA 模板

18 μL

--

--

PCR 陰性對照(水)

--

18 μL

--

PCR 陽性對照(熱帶念珠菌

PCR 陽性對照的 1000

倍稀釋液)

--

--

18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng):

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

95

5 min

PCR 反應(yīng)(35 個(gè)循環(huán))

95

15 sec

57

15 sec

72

40 sec

最后延伸

72

10 min

三、電泳檢測

5. 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn),陰性對照必須無任何擴(kuò)增,否則實(shí)驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

PCR常見問題的常見原因

1. cDNA產(chǎn)量的很低可能的原因:

1) RNA模板質(zhì)量低

2) mRNA濃度估計(jì)過高

3) 反應(yīng)體系中存在反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或反轉(zhuǎn)錄酶量不足

4) 同位素磷32過期

5) 反應(yīng)體積過大,不應(yīng)超過50μl

2. 擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳分析時(shí)沒有條帶或條帶很淺

1) 最常見的原因在于您的反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系

3) 與反應(yīng)起始時(shí)RNA的總量及純度有關(guān)

4) 建議在試驗(yàn)中加入對照RNA

5) 第一鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí),在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過1/10

6) 建議用Oligo(dT)或隨機(jī)引物代替基因特異性引物(GSP)用于第一鏈合成。由于RNA模板存在二級結(jié)構(gòu),如環(huán)狀結(jié)果,有可能導(dǎo)致GSP無法與模板退火;或SSⅡ反轉(zhuǎn)錄酶無法從此引物進(jìn)行有效延伸。

7) 目的mRNA中含有強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄中止位點(diǎn),可以試用以下方法解決:

a. 將第一鏈的反應(yīng)溫度提高至50℃。

b. 使用隨機(jī)六聚體代替Oligo(dT)進(jìn)行第一鏈反應(yīng)。

 

3. 產(chǎn)生非特異性條帶

1) RT陰性對照檢測是否被基因組DNA污染。如果RT陰性對照的PCR結(jié)果也顯示同樣條帶,則需要用DNase I重新處理樣品。

2) PCR反應(yīng)中,非特異的起始擴(kuò)增將導(dǎo)致產(chǎn)生非特異性結(jié)果。在低于引物Tm 25℃的溫度下進(jìn)行退火,降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結(jié)果的產(chǎn)生。

3) 由于mRNA剪切方式的不同,根據(jù)選擇引物的不同將導(dǎo)致產(chǎn)生不同的RT-PCR結(jié)果。

4. 產(chǎn)生彌散(smear)條帶

1) PCR反應(yīng)體系中第一鏈產(chǎn)物的含量過高

2) 減少引物的用量

3) 優(yōu)化PCR反應(yīng)條件/減少PCR的循環(huán)次數(shù)

4) 在用DNase處理被DNA污染的RNA樣品時(shí),其產(chǎn)生的寡核苷酸片段會產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增,一般會顯示為彌散背景。

5. 產(chǎn)生大分子量的彌散條帶

1) 大多數(shù)情況下是由于退火溫度過低而導(dǎo)致的非特異性的起始及延伸產(chǎn)生的

2) 對于長片段的PCR,建議將反應(yīng)體系中cDNA的濃度稀釋至1:10(或1:100-1:200

6. 在無反轉(zhuǎn)錄酶的情況下,對照RNA獲得擴(kuò)增結(jié)果

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