技術(shù)原理:

DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

使用及效果：

將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大小）或直徑約為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對(duì)原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡(jiǎn)便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

燃油燃料中硫含量分析用系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(柴油) 10*1mL/盒 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒D亞群RT-PCR試劑盒，停

燃油燃料中硫含量分析用系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(汽油) 5*5mL/盒 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒D亞群染料法熒光定量RT-PCR試劑盒，停

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燃油燃料中硫含量分析用系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(噴氣燃料) 5*5mL/盒 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒G亞群RT-PCR試劑盒

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燃油燃料中硫含量分析用系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(煤油) 5*5mL/盒 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒G亞群探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒

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Fe、Al、Cr三元素混合油液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 60mL/瓶 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒H亞群染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

閉口閃點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 250mL/瓶 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒H亞群探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒
枳實(shí)LAMP鑒定試劑盒免費(fèi)代測(cè)N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亞胺/N-羥基-5-降冰片稀-2,3-二酰亞胺/N-羥基5-降冰片烯-2,3-二羥基亞胺/N-羥基-5-降冰片烯-2,3-酰亞胺/N-羥基-5-降冰片烯-2,3-二羧酸酰亞胺/HONBBR，98%5克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，21715-90-2RT

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中文名稱(chēng)： N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亞胺

其他名稱(chēng)： N-羥基-5-降冰片稀-2,3-二酰亞胺；N-羥基5-降冰片烯-2,3-二羥基亞胺；N-羥基-5-降冰片烯-2,3-酰亞胺；N-羥基-5-降冰片烯-2,3-二羧酸酰亞胺

英文名稱(chēng)： HONB

其他名稱(chēng)： N-Hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboxylic acid imide

產(chǎn)品規(guī)格： BR，98%

包裝：5克/25克/100克/500克

CAS號(hào)：21715-90-2

C9H9NO3=179.17

級(jí)別：Biothnology grade

含量：≥98.0%

熔點(diǎn)：165～170℃

性狀：結(jié)晶粉末

用途：生化研究。多肽合成中的消旋抑制劑。有報(bào)道稱(chēng)其效果優(yōu)于N-羥基琥珀酰亞胺(HOSu，NHS)

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