服務流程：

1、根據(jù)客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

RNA質量檢測：

長雙歧桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1）紫外吸收法測定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

濃度測定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計算如下：

RNA溶于40 l DEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495的TE中，測得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

取5ul用來測量以后，剩余樣品RNA為35 l，剩余RNA總量為：

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②純度檢測

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。

2）變性瓊脂糖凝膠電泳測定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS，pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板，預留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內(nèi)，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

以下是公司正在促銷打折產(chǎn)品：

大鼠乙醇脫氫酶(ADH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人信號傳導子及轉錄激活子2(STAT2)免疫試劑盒 human STAT2 ELISA Kit

NAD激酶(NADK)測試盒 可見分光光度法 50管/24樣

Ratmacrophageinflammatoryprotein5,MIP-5ELISA試劑盒大鼠巨噬細胞蛋白5(MIP-5)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humanheatshockprotein27,HSP-27ELISA試劑盒人熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humanleukocytecommonaigen,LCA/CD45ELISAKit人白細胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

人H1N1 抗體(IgG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

兔素B2(TXB2)免疫試劑盒 Rabbit Thromboxane B2,TX-B2 ELISA Kit

橋粒糖蛋白2(DSC2)ELISA試劑盒 ，英文名： DSC2 ELISA Kit

rabbitEndothelin1,ET-1ELISA試劑盒兔子內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humanai-myelinaibodyIgA,AMAIgAELISA試劑盒人抗髓磷脂抗體IgA(AMAIgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanCaspase12,Casp-12ELISAKit人胱天蛋白酶12(Casp-12)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

脫氧膽酸鈉枸櫞酸鹽瓊脂  Desoxycholate Citrate Agar  250克  細菌總數(shù)的測定和分離培養(yǎng),沙門氏菌分離培養(yǎng)

DCLS瓊脂  DCLS Agar  250克  致病性腸桿菌的分離

Vogel-Johnson瓊脂  VJ Agar  250克  病源標本和其他標本中甘露醇陽性金黃色葡萄球菌的選擇性分離

NAC瓊脂培養(yǎng)基  NAC Agar Medium  100克  假單胞菌屬分離培養(yǎng)
長雙歧桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片精氨酸葡萄糖斜面瓊脂現(xiàn)貨促銷霍亂弧菌的復合生化試驗100克Arginine Dextrose Agar

苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)基現(xiàn)貨促銷用于細菌苯丙氨酸脫羧酶試驗100克Phenylalanine Deaminase Medium

假單胞P瓊脂現(xiàn)貨促銷銅綠（綠膿）假單胞菌色素生成試驗250克Pseudomonas Agar P

假單胞F瓊脂現(xiàn)貨促銷銅綠（綠膿）假單胞菌色素生成試驗250克Pseudomonas Agar F

衛(wèi)矛醇半固體瓊脂現(xiàn)貨促銷細菌衛(wèi)矛醇發(fā)酵試驗10克Dulcitol Semisolid Agar

四號瓊脂現(xiàn)貨促銷霍亂弧菌選擇性分離培養(yǎng)250克NO.4 Agar Base

我妻氏血瓊脂培養(yǎng)基基礎現(xiàn)貨促銷用于副溶血性弧菌的溶血試驗250克Wagstsuma Agar Base
注意事項：

1. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應盡量避免反復凍融，否則會導致模板的降解，影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間，也可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。

3. 電泳檢測時，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶，影響實驗結果。

4. 建議擴增片段長度1 kb以內(nèi)，以便擴增效率佳。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

保存方式

冰袋運輸。-20℃避光儲存，有效期一年。本品避免反復凍融。建議分裝保存。