注意事項：

1. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復凍融，否則會導致模板的降解，影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。

3. 電泳檢測時，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶，影響實驗結(jié)果。

4. 建議擴增片段長度1 kb以內(nèi)，以便擴增效率佳。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

保存方式

冰袋運輸。-20℃避光儲存，有效期一年。本品避免反復凍融。建議分裝保存。

服務(wù)流程：

1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉(zhuǎn)錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結(jié)果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

RNA質(zhì)量檢測：

艱難梭狀芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1）紫外吸收法測定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

濃度測定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計算如下：

RNA溶于40 l DEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495的TE中，測得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

取5ul用來測量以后，剩余樣品RNA為35 l，剩余RNA總量為：

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②純度檢測

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。

2）變性瓊脂糖凝膠電泳測定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS，pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板，預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內(nèi)，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。

樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）
以下是公司正在促銷打折產(chǎn)品：

大鼠整合素αM(ITGαM)ELISA試劑盒 ，英文名： ITGαM ELISA Kit

Mouse Clara cell protein (CC16) ELISA Kit 小鼠克拉拉細胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒

MouseIerleukin12,IL-12/P70ELISAKIT 小鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit人A1c規(guī)格：48T/96T

無去垢劑裂解液用于物理裂解

ELISAKitTG大鼠甲狀腺球蛋白規(guī)格：48T/96T

人16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

山羊生長激素釋放多肽(GHRP)免疫試劑盒 Goat Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit

尿17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISA試劑盒 ，英文名： 17-OHCS ELISA Kit

RabbitThrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISA試劑盒兔纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanBeta-naphthol,β-NphELISA試劑盒人β萘酚(β-Nph)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanCX3C-chemokinereceptor1,CX3CR1ELISAKit人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

中性粒細胞活化肽 (NAP)  ELISA 48T/96T 進口分裝

胃動素 (Motilin)  ELISA 48T/96T 進口分裝

噬中性及細胞活化肽 -2(NAP-2)  ELISA 48T/96T 進口分裝

神經(jīng)激肽 A(Neurokinin A)  ELISA 48T/96T 進口分裝

中心粒細胞彈性蛋白酶 (Neutrophil elastase)  ELISA 48T/96T 進口分裝

神經(jīng)絲蛋白 (NF)  ELISA 48T/96T 進口分裝

核轉(zhuǎn)錄因子 (NF-kB )  ELISA 48T/96T 進口分裝

核轉(zhuǎn)錄因子 p65(NF-kB p65)  ELISA 48T/96T 進口分裝

神經(jīng)生長因子 (NGF)  ELISA 48T/96T 進口分裝

神經(jīng)生長因子受體 (NGFR)  ELISA 48T/96T 進口分裝

人 Lipocalin-2(NGAL)  ELISA 48T/96T 進口分裝

神經(jīng)營養(yǎng)素 3(NT-3)  ELISA 48T/96T 進口分裝
艱難梭狀芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片磺基丙氨酸對照品產(chǎn)品CAS：

規(guī)格含量：50mg/支

磺基丙氨酸對照品

分子式:C3H7NO5S .H2O

分子量:187.17

類別:中檢所

用途：本品為磺基丙氨酸化學對照品，含量以 C3H7NO5S 計為 88.8%，供醋酸奧曲肽檢查用。使用前不需干燥處理。

包裝：棕色小瓶

規(guī)格：每瓶約 50mg

貯藏：避光，密閉保存。