服務(wù)流程：

1、根據(jù)客戶(hù)提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計(jì)引物）

2、抽提DNA、RNA，并對(duì)RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR

4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測(cè)數(shù)據(jù)、溶解曲線(xiàn)、擴(kuò)增曲線(xiàn))

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

RNA質(zhì)量檢測(cè)：

酯化梭狀芽孢桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒檢測(cè)1）紫外吸收法測(cè)定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋?zhuān)?:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

濃度測(cè)定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計(jì)算如下：

RNA溶于40 l DEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495的TE中，測(cè)得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

取5ul用來(lái)測(cè)量以后，剩余樣品RNA為35 l，剩余RNA總量為：

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②純度檢測(cè)

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。

2）變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS，pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板，預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內(nèi)，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。

使用方法：

一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用10μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）

以下是公司正在促銷(xiāo)打折產(chǎn)品：

大鼠整合素樣金屬蛋白酶17(ADAM17)ELISA試劑盒 ，英文名： ADAM17 ELISA Kit

人抗鏈球菌溶血素O/抗O(ASO)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanai-septolysinO,ASOELISAKit 96T/48T

大鼠白三烯D4(LTD4)免疫試劑盒 Rat leukoiene D4,LTD4 ELISA kit

CLIAKitfoHP(Huma-Hglycoprotein)ELISAKit人TH糖蛋白規(guī)格：48T/96T

全組織衰老特異性脂褐素靛酚原位染色試劑盒10次

ELISAKitApl/APA人抗磷脂抗體規(guī)格：48T/96T

人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

山羊三碘甲狀腺原氨酸(T3)免疫試劑盒 Goat i-iodothyronine，T3 ELISA Kit

鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白4(Gbp4)ELISA試劑盒 ，英文名： Gbp4 ELISA Kit

rabbitthrombomodulin,TMELISA試劑盒兔子調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanBH3ieractingdomaindeathagonist,BidELISA試劑盒人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanCXC-chemokinereceptor1,CXCR1ELISAKit人CXC趨化因子受體1(CXCR1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

trichosanthis瓜蔞子PCR鑒定試劑盒  BCYE Agar Base10個(gè)/包

GVPC瓊脂平板（9cm）Radix aristolochiae fangchi廣防己PCR鑒定試劑盒    GVPC Agar Base10個(gè)/包"

TSA培養(yǎng)基平板（9cm）Rhizoma ligustici藁本PCR鑒定試劑盒  TSA10個(gè)/包

RODAC培養(yǎng)皿（TSA）（55mm）Flos albiziae合歡花PCR鑒定試劑盒  RODAC10個(gè)/包

改良Skirrow氏瓊脂平板（9cm）Cortex albiziae合歡皮PCR鑒定試劑盒  Modified Skirrow Agar10個(gè)/包

甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂平板（9cm）Radix polygoni multiflori何首烏PCR鑒定試劑盒     Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base10個(gè)/包

BCYE-CYS瓊脂平板（9cm）Semen juglandis核桃仁PCR鑒定試劑盒  BCYE-CYS Agar10個(gè)/包"

即用型無(wú)菌管裝液體培養(yǎng)基Flos farfarae款冬花PCR鑒定試劑盒  

MUG快速鑒定大腸試劑Thallus laminariae昆布PCR鑒定試劑盒 5ml*10支/盒

MIU培養(yǎng)基Semen raphani萊菔子PCR鑒定試劑盒  MIU Medium20支/包

磷酸鹽緩沖液 （PBS pH7.2）Omphalia

抑制素 (Obestatin)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

人 OX40 Ligand(OX 40L )  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

8- 羥基脫氧鳥(niǎo)苷酸 (8-OHdG)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

食欲素 A(Orexin A)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

P53 蛋白  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

血小板活化因子 (PAF)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

相關(guān)蛋白 A(PAPP-A)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

粒細(xì)胞彈性蛋白酶 (pANCA)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

肺部和活化控制趨化因子 (PARC/CCL-18)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

增殖細(xì)胞核抗原 (PCNA)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

血小板衍化內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 (PD-ECGF)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

血小板衍化生長(zhǎng)因子 -AA(PDGF-AA)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
酯化梭狀芽孢桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒檢測(cè)2-氨基-2’-氯-5-硝基二苯酮產(chǎn)品CAS：

規(guī)格含量：100mg/支

2-氨基-2`-氯-5-硝基二苯酮對(duì)照品

分子式: C13H9ClN2O3

分子量: 276.68

類(lèi)別:中檢所

用途：2-氨基-2`-氯-5-硝基二苯酮對(duì)照品（2-Amino-2`-chloro-5-nitrobenzophenone）化學(xué)對(duì)照品系供中國(guó)藥典（二部）中*檢查時(shí)作對(duì)照用。

包裝及裝量： 棕色瓶，約 100mg/支

保存條件：遮光，密閉保存
注意事項(xiàng)：

1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織，若為長(zhǎng)期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10