新疆出血熱RT-PCR試劑盒-PCR定量檢測
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新疆出血熱病毒RT-PCR試劑盒PCR定量檢測
特別提示:包括新疆出血熱病毒RT-PCR試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:新疆出血熱病毒RT-PCR試劑盒
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品名稱 | 方法 | 規(guī)格 | 價格 |
新疆出血熱病毒RT-LAMP試劑盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
新疆出血熱病毒RT-PCR試劑盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
新疆出血熱病毒RT-染料法熒光定量PCR試劑盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
新疆出血熱病毒RT-探針法熒光定量PCR試劑盒 | 探針法 | 50次 | 3490元 |
新疆出血熱病毒RT-PCR試劑盒產(chǎn)品及特點:
因此快速靈敏檢測新疆出血熱病毒RT-具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增新疆出血熱病毒RT-,與其他植物沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
新疆出血熱病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分:
成分 | 編號 | 十孔盒包裝 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 | 1 mL(紅蓋) |
超純水 | 2 | 1 mL(亮黃色) |
新疆出血熱病毒RT- PCR 引物混合液 | 3 | 100 μL(白蓋) |
新疆出血熱病毒RT- PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) | 4 | 50 μL(黃蓋) |
核酸釋放劑(試用裝) | 5 | 20 次(1 mL,綠蓋) |
使用手冊 | 6 | 1 份 |
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,不要污染其他試劑。
自備試劑:樣品 DNA。
新疆出血熱病毒RT-PCR試劑盒使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。本試劑盒免費贈送20 次核酸釋放劑試用裝,其使用手冊可以從本公司網(wǎng)站訂購核酸釋放劑。
2. 如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL 新疆出血熱病毒RT- PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設置 PCR 反應(40μL 體系)
3. 對 N+2 個樣品,在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照,故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分:
成分 | N+2 個樣品管 | PCR 陰性對照 | PCR 陽性對照 |
PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
新疆出血熱病毒RT-PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 個樣品 DNA 模板 | 各 18 μL | -- | -- |
PCR 陰性對照(水) | -- | 18 μL | -- |
PCR 陽性對照(新疆出血熱病毒RT- PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液) | -- | -- | 18 μL |
4. 按下表設置 PCR 反應:
過程 | 溫度 | 時間 |
預變性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反應(35 個循環(huán)) | 95℃ | 15 sec |
57℃ | 15 sec | |
72℃ | 40 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、電泳檢測
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix在擴增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有預期條帶出現(xiàn),陰性對照必須無任何擴增,否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
PCR常見問題的常見原因
1. cDNA產(chǎn)量的很低可能的原因:
1) RNA模板質(zhì)量低
2) 對mRNA濃度估計過高
3) 反應體系中存在反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或反轉(zhuǎn)錄酶量不足
4) 同位素磷32過期
5) 反應體積過大,不應超過50μl
2. 擴增產(chǎn)物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺
1) 最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系
3) 與反應起始時RNA的總量及純度有關(guān)
4) 建議在試驗中加入對照RNA
5) 第一鏈的反應產(chǎn)物在進行PCR擴增時,在總的反應體系中的含量不要超過1/10
6) 建議用Oligo(dT)或隨機引物代替基因特異性引物(GSP)用于第一鏈合成。由于RNA模板存在二級結(jié)構(gòu),如環(huán)狀結(jié)果,有可能導致GSP無法與模板退火;或SSⅡ反轉(zhuǎn)錄酶無法從此引物進行有效延伸。
7) 目的mRNA中含有強的轉(zhuǎn)錄中止位點,可以試用以下方法解決:
a. 將第一鏈的反應溫度提高至50℃。
b. 使用隨機六聚體代替Oligo(dT)進行第一鏈反應。
3. 產(chǎn)生非特異性條帶
1) 用RT陰性對照檢測是否被基因組DNA污染。如果RT陰性對照的PCR結(jié)果也顯示同樣條帶,則需要用DNase I重新處理樣品。
2) 在PCR反應中,非特異的起始擴增將導致產(chǎn)生非特異性結(jié)果。在低于引物Tm 2至5℃的溫度下進行退火,降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結(jié)果的產(chǎn)生。
3) 由于mRNA剪切方式的不同,根據(jù)選擇引物的不同將導致產(chǎn)生不同的RT-PCR結(jié)果。
4. 產(chǎn)生彌散(smear)條帶
1) 在PCR反應體系中第一鏈產(chǎn)物的含量過高
2) 減少引物的用量
3) 優(yōu)化PCR反應條件/減少PCR的循環(huán)次數(shù)
4) 在用DNase處理被DNA污染的RNA樣品時,其產(chǎn)生的寡核苷酸片段會產(chǎn)生非特異性擴增,一般會顯示為彌散背景。
5. 產(chǎn)生大分子量的彌散條帶
1) 大多數(shù)情況下是由于退火溫度過低而導致的非特異性的起始及延伸產(chǎn)生的
2) 對于長片段的PCR,建議將反應體系中cDNA的濃度稀釋至1:10(或1:100-1:200)
6. 在無反轉(zhuǎn)錄酶的情況下,對照RNA獲得擴增結(jié)果
采購數(shù)量不能為空
聯(lián)系信息不能為空
驗證碼不正確