上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售構(gòu)巢曲霉PCR試劑盒現(xiàn)貨，

本試劑盒引物經(jīng)過優(yōu)化，反應特異性強，即開即用，歡迎新老客戶咨詢訂購。，本試劑盒引物經(jīng)過優(yōu)化，反應特異性強，即開即用，歡迎新老客戶咨詢訂購。

產(chǎn)品詳細信息

中文名稱：構(gòu)巢曲霉PCR試劑盒

英文名稱：Aspergillus nidulans

產(chǎn)品規(guī)格：50T/盒

用途】用于構(gòu)巢曲霉的檢測、診斷和流行病學調(diào)查。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過5次，有效期12個月。

提示：本品僅用于科研實驗，不能用作醫(yī)療及臨床診斷。

構(gòu)巢曲霉PCR試劑盒使用方法

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿，勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中；
液體標本：取適量標本13000rpm離心2min，棄上清。
1.2 DNA提取

1) 對上述處理好的標本加入40ul 核酸提取液，100℃恒溫處理10分鐘，13,000 rpm離心5分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)代檢測樣本總數(shù)，設所需要的PCR反應管管數(shù)為N（N=樣本數(shù)+1

管陰性對照+1管陽性對照），體系配制如下表：

試劑

WSSV 反應液

酶液

用量（樣本數(shù)為N）

20μl

1μl

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl，加入相應的

反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內(nèi)；

5. 結(jié)果分析判定

結(jié)果分析條件設定
設置基線（baseline）：一般情況下，對ABI 7500、7700等儀器設為6-15cycle，對PE5700設為3-15cycle,對MJ Research Option2設為6-12cycle。特殊情況可對基線適當調(diào)整。
設置閾值（threshold）:以閾值線剛超過陰性對照擴增曲線（無規(guī)則的噪音線）的zui高點。
結(jié)果判斷
陽性：檢測樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期；
可疑：檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復一次實驗，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期，為陽性，否則為陰性；
陰性：檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。
6. 對檢驗結(jié)果的解析

實驗室環(huán)境污染，試劑污染，標本交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果。

7. 質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：擴增曲線無對數(shù)生長期或無Ct值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯對數(shù)生長期，且Ct值≤32;
以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

6. 檢測方法的局限性

? 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關；

? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

? 陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導致假陽性結(jié)果；

? 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結(jié)果；

? 不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結(jié)果；

? 試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果；

? 本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

構(gòu)巢曲霉PCR試劑盒

◆ 注意事項
1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。
   1）*區(qū)：樣本制備區(qū)。
 2）*區(qū)：模板添加區(qū)。
   3）第三區(qū)：擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。
   ★ 分區(qū)之間*進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。
2．實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨立使用工具，需更換手套和實驗服。
3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。
4．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應避免反復凍融，推薦使用前離心30秒，并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
5．反應結(jié)束后，擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。
6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。