上海一研生物科技有限公司
主營產(chǎn)品: 生化試劑 ELISA試劑盒, 檢測試劑盒, 免疫組化試劑盒, 分子生物學試劑盒
新兇手弗朗西斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒進口試劑
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所在地區(qū)
上海市閔行區(qū)
主營產(chǎn)品
注意事項:
1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。
4. 建議擴增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴增效率佳。
5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
保存方式
冰袋運輸。-20℃避光儲存,有效期一年。本品避免反復凍融。建議分裝保存。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
新兇手弗朗西斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒進口試劑 | Francisella novicida | EY01P2037 |
服務流程:
1、根據(jù)客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針(染料法只需設計引物)
2、抽提DNA、RNA,并對RNA進行逆轉(zhuǎn)錄
3、實時熒光定量PCR
4、提供完整的實驗結果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)
5、返還樣品(引物、RNA和cDNA)
RNA質(zhì)量檢測:
新兇手弗朗西斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒進口試劑1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計算如下:
RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495的TE中,測得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g
取5ul用來測量以后,剩余樣品RNA為35 l,剩余RNA總量為:
35 l × 0.84 gl = 29.4 g
②純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
10×MOPS電泳緩沖液
濃度 成分
0.4M MOPS,pH 7.0
0.1M 乙酸鈉
0.01M EDTA
灌制凝膠板,預留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。
樣品RNA的抽提
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
以下是公司正在促銷打折產(chǎn)品:
人氨肽酶O(AP-O)ELISA試劑盒英文名稱: Crocein Orange G CAS:1934-20-9 分子式:C16H11N2NaO4S 分子量:350.32
人AP-1復合體亞基mu-1(AP-1 complex subunit mu-1)ELISA試劑盒英文名稱: Amaranth CAS:915-67-3 分子式:C20H11N2Na3O10S3 分子量:604.46
人AP-2復合物亞基β(AP2B1)ELISA試劑盒英文名稱: Alkali blue 6B CAS:1324-80-7 分子式:C37H30N3NaO4S 分子量:635.71
人天門冬氨酰/天冬酰胺酰β羥化酶(Aspartyl/asparaginyl beta-hydroxylase)ELISA試劑盒英文名稱: Thymolphthalein complexon CAS:1913-93-5 分子式:C38H44N2O12 分子量:720.78
人腺苷受體A1(Adenosine receptor A1)ELISA試劑盒英文名稱: Methylthymol blue sodium salt CAS:1945-77-3 分子式:C37H40N2Na4O13S 分子量:844.75
人腺苷受體A2a(Adenosine receptor A2a)ELISA試劑盒英文名稱: Chlorophenol Red sodium salt CAS:123333-64-2 分子式:C19H11Cl2NaO5S 分子量:445.25
人線粒體琥珀酸鹽半醛脫氫酶(SSADH)ELISA試劑盒英文名稱: Chlorophenol Red CAS:4430-20-0 分子式:C19H12Cl2O5S 分子量:423.27
人醛脫氫酶家族16成員A1(ALDH16A1)ELISA試劑盒英文名稱: Orange CAS:523-44-4 分子式:C16H11N2NaO4S 分子量:350.32
人氨肽酶Q(AP-Q)ELISA試劑盒英文名稱: Erythrosin B CAS:16423-68-0 分子式:C20H6I4Na2O5 分子量:879.86
人腺瘤蛋白(Protein APC)ELISA試劑盒英文名稱: Eriochrome Red B CAS:3618-63-1 分子式:C20H15N4NaO5S 分子量:446.41
CAS No.:2101836-45-5
中文名:
別名:
分子式:C21H21NO5
性狀:Yellow powder
純度:98.0%
新兇手弗朗西斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒進口試劑2-單硝酸異山梨酯產(chǎn)品CAS:16106-20-0
規(guī)格含量:50mg/支
2-單硝酸異山梨酯對照品
英文名稱:Isosorbide 2-nitrate
類別:化學對照品
分子式:C6H9NO6
分子量:191.14
CAS 號:16106-20-0
用途:2-單硝酸異山梨酯對照品供檢查用。本品僅供國家藥品標準對應項下檢驗檢測用。
特性量值:供 HPLC 法測定,按 C6H9NO6計,含量為 100.0%。
使用方法:使用前不需干燥處理。
包裝:棕色西林瓶
規(guī)格:50mg/支
貯藏:遮光,密閉,2-8℃保存。