上海一研生物科技有限公司
主營產(chǎn)品: 生化試劑 ELISA試劑盒, 檢測試劑盒, 免疫組化試劑盒, 分子生物學(xué)試劑盒
貂源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒進(jìn)口試劑
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主營產(chǎn)品
產(chǎn)品及特點(diǎn):
貂源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因,是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標(biāo)記基因,因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測貂源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 根據(jù)貂源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針,能專一性地檢測出樣品中的貂源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒成分,但不能檢測其他非貂源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒成分。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 一管式閉管操作,降低了交叉污染。
5. 快速,整個(gè)檢測過程(按一個(gè)樣品計(jì))所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí)。
6. 本只能用于科研,足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。
產(chǎn)品名稱 | 貂源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒進(jìn)口試劑 |
英文名稱 | |
貨號 | EY01P2689 |
PCR在分子和DNA分析中有多種用途,下面就向大家介紹PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
通用原則:
1, 先選擇好探針,然后設(shè)計(jì)引物使其盡可能的靠近于探針。
2, 擴(kuò)增子的長度應(yīng)不超過400bp,理想的*能在100-150bp內(nèi),擴(kuò)增片斷約短,有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),從而會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低,及在SG分析中非特異信號。
4, 為了保證效率和重復(fù)性,應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個(gè)連續(xù)的G)
5, 將引物和探針互相進(jìn)行配對檢測,以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。
b),探針設(shè)計(jì)指導(dǎo)
1,在設(shè)計(jì)引物之前設(shè)計(jì)探針
2,探針的Tm值應(yīng)在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。
3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,5’G會(huì)有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會(huì)存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會(huì)降低反應(yīng)效率,這時(shí)就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針。
6, 探針應(yīng)盡可能的短,不要超過30個(gè)bp。
7, 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu)。
熒光化學(xué)物質(zhì):
實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料?,F(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的*技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補(bǔ)配對,導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
熒光定量PCR服務(wù):
簡介:實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗(yàn)證基因芯片,siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
(03)請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設(shè)計(jì)與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
(03)進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
(04)實(shí)驗(yàn)完成后,提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn):
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。
氣腫疽梭菌PCR檢測試劑盒5g
侵襲性大腸桿菌PCR檢測試劑盒5g
芹菜PCR檢測試劑盒5g
禽病毒PCR檢測試劑盒5g
禽病毒PCR檢測試劑盒5g
禽呼腸孤病毒PCR檢測試劑盒5g
禽結(jié)核桿菌PCR檢測試劑盒5g
病毒H5N1亞型PCR檢測試劑盒5g
病毒H5亞型PCR檢測試劑盒5g
病毒H7亞型PCR檢測試劑盒5g
病毒H9亞型PCR檢測試劑盒5g
病毒PCR檢測試劑盒5g
病毒基因分型PCR檢測試劑盒5g
通用型H1-H15亞型PCR試劑盒5g
禽腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑盒5g
磷酸奧司他韋(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 L-dopa,Levodopa
磷酸奧司他韋 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,BR L-dopa
磷酸銨三水(>98%,BR) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR L-a-Aminoadipic acid
磷酸-d3(100g ) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR L-Cyclopropylalanine
磷酸2-基己基二酯(>90.0%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR L-Homophenylalanine
磷鉬酸銨(>96.5%,BR) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR L-Pipecolic acid
磷鉬酸 質(zhì)量規(guī)格:99%,BR L-Norvaline
磷霉素鈉 質(zhì)量規(guī)格:0.99 L-tert-Leucine
磷霉素鈣(水溶) 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR L-Theanine
磷霉素氨三醇(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 L-Theanine
貂源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒進(jìn)口試劑吳茱萸次堿對照品產(chǎn)品CAS:84-26-4
規(guī)格含量:20mg
吳茱萸次堿對照品
英文名稱:Rutaecarpine
分子式:C18H13N3O
分子量:287.32
CAS號:84-26-4