運(yùn)輸和保存：

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

    1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，*將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；

    4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

    5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

    1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

    2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

    4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗（Abbioscience公司），然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

    5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

    6、用PBS沖洗3次，每次10min，*在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，吹打均勻后，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進(jìn)行凍存。

以下是公司正在打折促銷產(chǎn)品：

HumanCyclin-D1ELISAKit人細(xì)胞周期素D1  規(guī)格：2ml/支  訂購(gòu)|咨詢

ES(HumanEndostatin)ELISAKit人內(nèi)皮抑素  規(guī)格：0.2g/支  訂購(gòu)|咨詢

Fbg(MouseFibrinogen)ELISAKit小鼠血纖蛋白原  規(guī)格：2g  訂購(gòu)|咨詢

TATELISAKit大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物  規(guī)格：50mg  訂購(gòu)|咨詢

ATRELISAKit大鼠抗凝血酶受體  規(guī)格：0.5g  訂購(gòu)|咨詢

FE(Humanferritin)ELISAKit人鐵蛋白  規(guī)格：50mg/瓶  訂購(gòu)|咨詢

PAF(Mouseplateletactivatingfactor)ELISAKit小鼠血小板活化因子  規(guī)格：50mg  訂購(gòu)|咨詢

TRELISAKit大鼠凝血酶受體  規(guī)格：0.15ml  訂購(gòu)|咨詢

MTF(Humanmicrotransferrinuria)ELISAKit人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白  規(guī)格：50mg  訂購(gòu)|咨詢

smActinin-Alpha(MouseskeletalmuscleActinin-Alpha)ELISAKit小鼠橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α  規(guī)格：1g  訂購(gòu)|咨詢

MYS(MouseMyosin)ELISAKit小鼠肌球蛋白  規(guī)格：20mg  訂購(gòu)|咨詢

cTn-IELISAKit大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ  規(guī)格：1g  訂購(gòu)|咨詢

TIMP-1(Humantissueinhibitorofmetalprotease1)ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1  規(guī)格：20mg  訂購(gòu)|咨詢

PI3KELISAKit大鼠磷酸肌醇3激酶  規(guī)格：50mg  訂購(gòu)|咨詢

MHCI/H-2I(MousemajorhistocompatibilitycomplexI)ELISAKit小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類  規(guī)格：2g  訂購(gòu)|咨詢
Hela/DDP人宮頸癌順鉑耐藥株23,24-Dihydrocucurbitacin F和厚樸酚（標(biāo)準(zhǔn)品）  分子式：C20H28O3  性狀：Powder  純度：98.0%

Cucurbitacin V和厚樸酚  分子式：  性狀：Powder  純度：98.0%

Heynic acid河豚毒素（標(biāo)準(zhǔn)品）  分子式：C36H48O18  性狀：Powder  純度：97.0%

Hemsleyacin D紅景天苷(標(biāo)準(zhǔn)品)  分子式：C34H46O17  性狀：Powder  純度：98.0%

Sericic acid紅景天苷  分子式：C34H40O16  性狀：Powder  純度：97.0%

16-Desoxycucurbitacin V葒草苷（標(biāo)準(zhǔn)品）  分子式：C34H46O16  性狀：Powder  純度：97.0%

IsoarborinolXAV-939;NVP-XAV 939  分子式：C34H46O16  性狀：Powder  純度：98.0%

Isoarborinol acetate胡黃連苷I（標(biāo)準(zhǔn)品）  分子式：C34H46O17  性狀：Powder  純度：97.0%

Ganoderic acid C1胡黃連苷 II(標(biāo)準(zhǔn)品)  分子式：C32H44O16  性狀：Powder  純度：98.0%