ELISA檢測(cè)概述
      ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
產(chǎn)品名稱：小鼠細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒
英文名稱：Mouse Cyclin-D1 Elisa Kit
貨號(hào)：BH-H8444
規(guī)格：48T/96T
自備物品:
1.     酶標(biāo)儀（450nm）
2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.     37℃恒溫箱

應(yīng)用范圍：血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體（本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室科研及非臨床用途）
     小鼠細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。注意事項(xiàng)：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請(qǐng)避光保存。
7． 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.        標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.         加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.         配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.         溫育：操作同3。
8.         洗滌：操作同5。
9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.     測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
A9(小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00mg/mL,基體：水）Saccharin  salt solution質(zhì)量規(guī)格：1.00mg/mL,基體：水

PVRL2 Others Human 人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 桃醛（標(biāo)準(zhǔn)品）γ-Undecanolactone質(zhì)量規(guī)格：0.96

水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S5甲基壬基甲酮（標(biāo)準(zhǔn)品）2-Undecanone質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

DKKL1 Others Human 人 DKKL1 / Soggy-1 / SGY-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2′-脫氧胞苷 鹽酸鹽2′-Deoxycytidine hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：0.99

膠原酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL1酸氫二銨Ammonium phosphatedi basic質(zhì)量規(guī)格：SP
NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標(biāo)簽)2,9-二氯-1,10-菲羅啉(>97.0%(GC)(T))2,9-Dichloro-1,10-phenanthroline質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)

MDA-MB-435(人癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)3,4,7,8-四甲基-1,10-菲羅啉(>98.0%(HPLC)(T))3,4,7,8-Tetramethyl-1,10-phenanthroline質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

間充質(zhì)干細(xì)胞生長添加物-無血清MSCGS-25,5'-硫代雙水楊酸(>98.0%(GC)(T))5,5'-Thiodisalicylic Acid質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)

NRXN3 Others Human 人 NRXN3 / Neurexin-3-beta 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 4,4'-二氯二苯砜(>98.0%(GC))4,4'-Dichlorodiphenyl Sulfone質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

COS-1 非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞雙[3,5-二溴-4-(2-羥乙氧基)苯基]砜(>96.0%(GC))Bis[3,5-dibromo-4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)
小鼠細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒PTX3 Others Human 人 PTX3 / TNFAIP5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) Fmoc-Tyr(tBu)-OHFmoc-O-叔丁基-L-酪酸500克特，98.5%

BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.11,4-二肖基本;隊(duì)二肖基本 1,4-bqnzqnq 9-94-4

NCR1 Others Rat 大鼠 NCR1 / NK-p46 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 水合安嘌呤(-20℃) Mqthotrqxctq 1929-2-

原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1mlDodecane正十二烷20毫克AR，98%

ECV-304細(xì)胞，人臍靜脈內(nèi)皮(具有T24細(xì)胞特性) 金黃色葡萄球菌 人牙齦成纖維細(xì)胞總RNAHGF NA13007-92-6六羰基ChroMiuM hexacarbonyl
EB (NBL-4)細(xì)胞，牛胚氣管細(xì)胞 SW 1088[SW-1088; SW1088](人腦星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞) CM-H018人成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL鎘黃，英文名或英文縮寫：Cadmium sulfide，級(jí)別：AR，99.5%，規(guī)格：10克

EGF Protein Mouse 重組小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白鱗鉬醋銨 cMMONIUM PHOSPHOMOLYBDcTq HYDRcTq 2473-94-3

MKN-28(人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)芐氧羰基甘酸，英文名或英文縮寫：CBZ-L-Gly，級(jí)別：特，99%，規(guī)格：100克

前列腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基PEpiCMFORMALDEHYDE-FREERNAGELKIT無RNA膠試劑盒RTsigma

SELE Others Rat 大鼠 E-selectin / ELAM-1 / CD62E 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 3374-22-9DL-半胱酸;DL-2-基-3-;DL-半膀胱基酸;DL-β-;DL-脬基酸DL-Cysteine