ELISA檢測(cè)概述
      ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAG Ab)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒
英文名稱(chēng)：Rat anti-myelin associated glycoprotein antibody, MAG Ab Elisa Kit
貨號(hào)：BH-H8544
規(guī)格：48T/96T
自備物品:
1.     酶標(biāo)儀（450nm）
2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.     37℃恒溫箱

應(yīng)用范圍：血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體（本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室科研及非臨床用途）
     大鼠抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAG Ab)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。注意事項(xiàng)：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請(qǐng)避光保存。
7． 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.        標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.         加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.         配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.         溫育：操作同3。
8.         洗滌：操作同5。
9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.     測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
HB611(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM十二水合硫酸鐵銨(>98%,BR)Ammonium iron(II) sulfate, hexahydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

腎系膜細(xì)胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)鉬酸銨四水Ammonium molybdate, tetrahydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

ADRBK1 Others Human 人 GRK2 / ADRBK1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1鉬酸銨(>96.5%,BR)Ammonium phosphomolybdate , hydrate質(zhì)量規(guī)格：>96.5%,BR

雜交瘤(B類(lèi));Z153A2A5B3A121酸氫銨鈉(>98%,BR)Ammonium  phosphate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

HUVEC細(xì)胞，人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 人肝細(xì)胞正常,HL-7702細(xì)胞 CL-0072Daudi(人瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2丁二酸銨(>98%,BR)Ammonium succinate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
HS 683(人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 生孢梭菌肌苷-5'-三1酸三鈉鹽ITP?Na3質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

滑膜細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鳥(niǎo)苷-5'-三1酸二鈉鹽GTP.Na2質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

CNDP2 Others Mouse 小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 4,4'-二正辛氧基氧化偶氮苯(>95.0%(N))4,4'-Di-n-octyloxyazoxybenzene質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(N)

人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞;Daoy4,4'-二壬氧基氧化偶氮苯4,4'-Dinonyloxyazoxybenzene質(zhì)量規(guī)格：

HMy2.CIR細(xì)胞，人B母細(xì)胞 人肝癌細(xì)胞,H7402細(xì)胞 CL-0200RWPE1(人前列腺上皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×24'-(反-4-戊基環(huán)己基)二苯基-4-甲腈(>98.0%(GC))4'-(trans-4-Amylcyclohexyl)biphenyl-4-carbonitrile質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)
大鼠抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAG Ab)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒P3HR1細(xì)胞，人EBV陽(yáng)性B瘤細(xì)胞 大鼠胰腺癌細(xì)胞株,DSL-6A/C1細(xì)胞 人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNAHA-c cDNA阿立哌唑-d8質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Aripiprazole-d8

NCI-H716(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2阿立哌唑-d8 (丁基-d8)質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Aripiprazole-d8 (Butyl-d8)

CoC1(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0142LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠氣管上皮細(xì)胞;RTE阿扎那韋-標(biāo)記d4質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Atazanavir - Labeled d4

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CHO4'-羥基托莫西汀質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口4'-Hydroxy Atomoxetine

PTPN2 Others Human 人 PTPN2 / PTPT 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 脫氯阿托伐醌質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Deschloro Atovaquone
PRLR Others Human 人 PRLR / Prolactin Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 3,4-二羥基本酸100毫克

人內(nèi)根殼細(xì)胞總RNAHHIRSC NA對(duì)基-α-D-吡... 4-Nitrophenyl α-D-galactopyranoside 7493-95-0 100MG 通用試劑

VEGFA Others Rat 大鼠 VEGF164 / VEGFA 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1 JP-TS cVIcTION FUqL 6474-47-8

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr-偶氮脒類(lèi)引發(fā)劑V401克2～8℃

NCI-H460[H460]細(xì)胞，大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞,H4細(xì)胞 小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;W6/322，4-二硝基扶本(劇毒)(陰涼)2,4-fluorobenzene