ELISA檢測(cè)概述
      ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒
英文名稱(chēng)：Rat Caspase-9, Casp-9 Elisa Kit
貨號(hào)：BH-H8703
規(guī)格：48T/96T
自備物品:
1.     酶標(biāo)儀（450nm）
2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.     37℃恒溫箱

應(yīng)用范圍：血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體（本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室科研及非臨床用途）
     大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶(hù)提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。注意事項(xiàng)：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請(qǐng)避光保存。
7． 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.        標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.         加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.         配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.         溫育：操作同3。
8.         洗滌：操作同5。
9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.     測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
大鼠腎小管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL舒馬曲坦-d6Sumatriptan-d6質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

RH-35大鼠肝癌細(xì)胞 RH-35 rat hepatoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS舒馬曲坦-d6琥珀酸鹽Sumatriptan-d6 Succinate質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

IGFBP7 Protein Human 重組人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 (His 標(biāo)簽)雙氯芬酸甲酯Diclofenac Methyl Ester質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

HA(人羊膜細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基ECM雙氯芬酸酰胺Diclofenac Amide質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

食管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)芴甲氧羰基-加巴噴丁Fmoc-Gabapentin質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)雌激素酮 3-硫酸鉀鹽Estrone 3-sulfate potassium salt質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

H-4-II-E細(xì)胞，大鼠肝細(xì)胞瘤 人卵巢癌細(xì)胞,Caov-3細(xì)胞 人髓核細(xì)胞裂解物HNPCL雌激素酮 3-甲酯Estrone 3-methyl ether質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO E64-甲基傘形酯-N-乙酰-b-D-氨基半乳糖苷(>98%,BR)4-Methylumbelliferyl N-acetyl-β-D-galactosaminide質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

IFNB1 Others Human 人 Ierferon beta / IFN-beta / IFNB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 對(duì)硝基芐醇(>98%,BR)4-Nitrobenzyl alcohol質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

家貓腎細(xì)胞;CATK1無(wú)毒型核酸染色劑4S Green Nucleic Acid Stain 4S Green質(zhì)量規(guī)格：BR
大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒PDHA1 Others Human 人 PDHA1 / C54G1 (aa 30-390) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸柔紅霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Daunorubicin HCl

人少突膠質(zhì)細(xì)胞HO鹽酸柔紅霉素(進(jìn)口)質(zhì)量規(guī)格：USP,進(jìn)分sigmaD8809 Daunorubicin HCl

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS3;Vero-HCV-NS3 人腎癌細(xì)胞，A-704細(xì)胞 AGS(胃腺癌細(xì)胞)達(dá)格列嗪;達(dá)格列凈質(zhì)量規(guī)格：>97%，BR，生化試劑級(jí)Dapagliflozin

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SH-SY5Y甘草查而酮 A(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：含量≥98.0%，標(biāo)準(zhǔn)品Licochalcone A

FGF18 Others Mouse 小鼠 FGF18 / FGF-18 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 三氯卡班質(zhì)量規(guī)格：>98.0%Triclocarban
人神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLSBES；2-溴乙基磺酸鈉質(zhì)量規(guī)格：>98.5% 2-bromoethanesulphonate

JB6-C41細(xì)胞，小鼠皮膚細(xì)胞 SHG44(膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 犬腎細(xì)胞系/野生型;MDCK/wildBICINE；N,N-二羥乙基甘氨酸質(zhì)量規(guī)格：>99%BICINE

EFNA1 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)BES  salt; N,N-二(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸鈉質(zhì)量規(guī)格：>99%BES  Salt

LS 180(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 原代上皮細(xì)胞特制無(wú)血清添加劑Many types of cells包裝：1mlBES free acid; N,N-(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸質(zhì)量規(guī)格：>99%BES free acid

人支氣管上皮細(xì)胞HBEpiCBz-2'-脫氧胞苷亞1酰胺單體質(zhì)量規(guī)格：>98%Bz-dC Phosphoramidite