邦景剛果錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
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品牌 邦景
產(chǎn)品名稱 剛果錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱 Trypanosoma congolense
貨號 BJP64210
規(guī)格 50次
單位
分類 熒光定量PCR試劑盒
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹

PCR在分子克隆和DNA分析中有多種用途,下面就向大家介紹PCR實驗方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物1(10pM)                 

2 μl     引物2(10pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至 50 μl 

產(chǎn)品名稱

英文名稱

貨號

剛果錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

Trypanosoma congolense

BJP64210

 


熒光定量PCR原理:

產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR最早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。

一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)最終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。


實時熒光定量PCR:

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:

1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性極好,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。

2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性最好的定量方法,已得到全世界的公認,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。


定量PCR方法:

a、競爭法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標(biāo)記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。

b、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時,內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。

c、PCR-ELISA法

利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)N-Cadherin Antibody100 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CD6 (E9Y7Y) Rabbit mAb100 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)MST3b Antibody100 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)LSD1 (1B2E5) Mouse mAb100 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CXXC1 (D1R5R) Rabbit mAb100 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Erk3 Antibody100 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Pan-Cadherin Antibody20 ul

基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Pan-Cadherin Antibody400 ul
剛果錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒偶氮苯(標(biāo)準(zhǔn)品)48T/96THuman ACA-IgG(Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit

酸洗石棉48T/96THuman ACAT2(Acetyl Coenzyme A Acetyltransferase 2, cytosolic) ELISA Kit

苊(標(biāo)準(zhǔn)品)48T/96THuman ACACA(Acetyl-CoA Carboxylase) ELISA Kit

鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3)48T/96THuman ACHAP(Acetylcholinesterase Associated Protein) ELISA Kit

鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL,基體:5%HCl)48T/96THuman IFN-β(Interferon beta) ELISA Kit

苯甲醚(標(biāo)準(zhǔn)品)48T/96THuman CGA(Chromogranin A) ELISA Kit

鄰苯二甲酸二丁氧基乙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)48T/96THuman FTH1(Ferritin heavy chain) ELISA Kit

三聚氰酸(標(biāo)準(zhǔn)品)48T/96THuman FTL(Ferritin light chain) ELISA Kit

(+/-)-兒茶精(標(biāo)準(zhǔn)品)48T/96THuman RORC(Nuclear receptor ROR-gamma) ELISA Kit

鄰苯二甲酸二庚酯(標(biāo)準(zhǔn)品)48T/96THuman CNTF(Ciliary neurotrophic factor) ELISA Kit

反油酸(標(biāo)準(zhǔn)品)48T/96THuman FGF1(Heparin-binding growth factor 1) ELISA Kit

十七碳酸(標(biāo)準(zhǔn)品)48T/96THuman IFNA1(Interferon alpha-1/13) ELISA Kit

十七碳酸(98%)48T/96THuman FLT3(Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3) ELISA Kit

隱色孔雀石綠(標(biāo)準(zhǔn)品)48T/96THuman LIF(Leukemia inhibitory factor) ELISA Kit

二十酸甲酯(標(biāo)準(zhǔn)品)48T/96THuman PDGFA(Platelet-derived growth factor subunit A) ELISA Kit

對照品透明質(zhì)檢測試劑盒20mg

脫氧核糖胸腺核苷鈉 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg/瓶 化原癌基因c-Jun抗體 EJ/GlyRS ELISA Kit EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成酶抗體(EJ/GlyRS)ELISA試劑盒

免疫球蛋白G3(IgG3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 Galactolipase / PNLIPRP2 蛋白 (His 標(biāo)簽)現(xiàn)貨促銷食品中李斯特菌的選擇培養(yǎng),用于非乳制品及加工后食品中單核細胞增生李斯特菌的選擇性增加

Human dermatopontin,DPT ELISA Kit  人皮膚蛋白CAS號:狀腺素蘋果檢測試盒100UHuman/人Elisa試盒328701

對照品透明質(zhì)蛋白聚糖連結(jié)蛋白1檢測試劑盒20mg

2-基-d3-17β-雌二醇 質(zhì)量規(guī)格:國進口 2-Methoxy-d3-17β-estradiol Normal Goat Serum For Blocking/封閉用山羊血清工作液(免組封閉液)10ml國產(chǎn)gersion

C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 RCN3 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價供應(yīng)

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP4)CST9/Cystatin 9  胱抑素9/半胱氨蛋白酶抑制9抗體規(guī)格:96T/48TCisplatin規(guī)格:50mg多效生長子檢測試盒10mg人關(guān)節(jié)滑膜成纖維細胞1x10^6cells

≥90% (HPLC)500g100gD果糖1,6二三鈉Cytochrome P450 Side Chain Cleavage Enzyme

 NCI-H596(人肺腺鱗細胞)紅垂幕菇 Hypholoma cinnabarinum

Total Genes Chromogenic Medium Dish細胞周期蛋白依賴性激酶2檢測試盒20mg凝血酶原檢測試盒Fibrinogen

96%100g5mlD果糖1,6二三鈉Pachytene checkpoint protein 2 homolog

己二雙(2-乙基己基)酯(>98.0%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) Bis(2-ethylhexyl) Adipate

進口乳膠手套100只/盒 10盒/箱  麥迪康36062074?20°C干燥避光保存D天冬氨HPLC≥98%組蛋白去?;?檢測試盒20mg20HETE標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, 圓葉腫柄菊素 A

96%500g5gD果糖1,6二三鈉Otoconin90

PU-H71 質(zhì)量規(guī)格:>98%,HSP90抑制劑 PUH71 V79(倉鼠肺細胞)黑木耳 Auricularia auricula

標(biāo)準(zhǔn)品,中藥標(biāo)準(zhǔn)品, 二丁香樹脂醇酯
實驗過程:

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5.Taq酶

二、操作步驟 

1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

       引物1(10pM)               2μl

       引物2(10PM)              2μl

       Taq酶(2U/μl)            1μl

      DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl

      加ddH2O至               50 μl

    視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。

3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

三、注意事項

1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。

2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。

3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。

4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。

5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。

6.產(chǎn)品僅用于科研試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。

7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。

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