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牛呼吸道合胞體探針法熒光定量PCR試劑盒
價(jià)格
訂貨量(盒)
￥3990.00
≥1
￥3790.00
≥5
店鋪主推品 熱銷潛力款
聯(lián)系人 蔡經(jīng)理 銷售經(jīng)理 
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上海康朗生物科技有限公司
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好貨推薦
商品參數(shù)
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商品介紹
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聯(lián)系方式
主要組成成分 探針法 qRT-PCR 緩沖液，探針法 qRT-PCR 酶混合液，熒光 PCR 專用模板稀釋液，探針法 qRT-PCR引物混合液，qRT-PCR 探針，探針法 qRT-PCR陽性對照(1×10E8 拷貝/μL)，核酸釋釋劑，使用手冊
貨號(hào) KL15-239
性狀 水劑
規(guī)格 50T
貯藏 -20℃保存
有效期 一年
貨期 現(xiàn)貨
價(jià)格 3990
產(chǎn)品及特點(diǎn) 具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、省時(shí)等特點(diǎn)。
品牌 康朗生物/KALANG
商品介紹
牛呼吸道合胞體病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
Bovine Respiartory Syncytial Virus(BRSV)
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
熒光定量PCR是在PCR體系中加入熒光化合物(熒光染料或熒光探針)。利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，使每個(gè)循環(huán)變得“可見”。本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量 RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測牛呼吸道合胞體病毒的試劑盒。
產(chǎn)品名稱 | 方法 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
牛呼吸道合胞體病毒LAMP試劑盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
牛呼吸道合胞體病毒PCR試劑盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
牛呼吸道合胞體病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
牛呼吸道合胞體病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 | 探針法 | 50次 | 3490元 |
它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)牛呼吸道合胞體病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
成分 | 編號(hào) | 十孔盒包裝 |
探針法 qRT-PCR 緩沖液 | A | 500μL（黃蓋） |
探針法 qRT-PCR 酶混合液 | B | 100μL（紅蓋） |
熒光 PCR 專用模板稀釋液 | C | 1 mL（黃蓋） |
牛呼吸道合胞體病毒探針法 qRT-PCR引物混合液 | D | 100 μL（白蓋） |
牛呼吸道合胞體病毒 qRT-PCR 探針 | E | 50 μL（棕色管） |
牛呼吸道合胞體病毒探針法 qRT-PCR陽性對照(1×10E8 拷貝/μL) | F | 50 μL（黃蓋） |
核酸釋釋劑（試用裝） | G | 20 次（1mL，綠蓋） |
使用手冊 | H | 一份 |
運(yùn)輸及保存： 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為12個(gè)月。
自備試劑 ：樣品 RNA。
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 RNA 的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，最好設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。也以選購本公司的柱式病毒RNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送20次免RNA提取的核酸釋放劑試用裝，該釋放劑的裂解液可以直接作為RT-PCR模板，省略了RNA提取步驟。
三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR 管，其中N+2個(gè)用于上步得到的 N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4 個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽性對照（用第4號(hào)管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加）：
成分 | 樣品管N+2個(gè) | RT-PCR陰性對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管 （2-7 管） |
探針法qPCR緩沖液 | 各 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
探針法 qPCR 酶混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
牛呼吸道合胞體病毒qRT-PCR探針 | 各 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
牛呼吸道合胞體病毒探針qRT-PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
待測樣品 RNA 模板 | 各 5 μL | -- | -- |
超純水 | -- | 5 μL | -- |
第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液（2-7 號(hào)） | -- | -- | 各5 μL（2號(hào)樣到2號(hào)管，3號(hào)樣到3 號(hào)管…） |
11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 qRT-PCR：
過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |
預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |
qRT-PCR 反應(yīng)（40 個(gè)循環(huán)） | 94℃ | 15 sec |
60℃ | 1 min（采集 FAM 通道的熒光信號(hào)） |
五、數(shù)據(jù)處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 35，則為陽性。
六、常見問題與解決方法:
常見問題 | 可能原因 | 解決方法 |
陽性對照、待測樣本均無條帶。 | PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。 | 使用梯度PCR摸索PCR反應(yīng)條件。 |
PCR試劑保存不當(dāng)失去活性。 | 2× PCR Mix應(yīng)保存于-20℃，使用時(shí)避免反復(fù)凍融。若使用頻繁，可在4℃短時(shí)間存放。 | |
引物設(shè)計(jì)問題。 | 嘗試重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。 | |
陽性對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱。 | 不當(dāng)儲(chǔ)存或長期儲(chǔ)存引起試劑活性喪失。 | 使用新鮮的試劑。 |
加入組織裂解液過量。 | 增大反應(yīng)體系，或減少裂解液的用量。 | |
樣本裂解混合液保存不當(dāng)或保存時(shí)間過久，DNA基因組已經(jīng)降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進(jìn)行PCR。 | |
模板加入量不適合。 | 在反應(yīng)體系10-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。反應(yīng)效性能較差時(shí)，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。 | |
PCR循環(huán)數(shù)不足。 | 適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因?yàn)槟０鍙?fù)雜，一般PCR反應(yīng)要比用純化的 DNA模板多5-10個(gè)循環(huán)為佳。 | |
非特異性擴(kuò)增 | PCR退火溫度太低，循環(huán)數(shù)、引物濃度或模板濃度太高。 | 增加PCR退火溫度，降低PCR循環(huán)數(shù)、引物濃度或模板濃度。 |
PCR引物錯(cuò)配。 | 重新設(shè)計(jì)PCR引物。 | |
配制PCR反應(yīng)體系時(shí)溫度太高或配制完成后放置時(shí)間太久。 | PCR反應(yīng)體系的配制在低溫下進(jìn)行，配制完成后盡快進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。 | |
陰性對照出現(xiàn)目的條帶 | 操作工具或試劑污染。 | 實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時(shí)應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。 |
樣本間交叉污染。 | 每個(gè)取樣器只對一個(gè)樣本使用；或取完一個(gè)樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復(fù)涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。 |
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