柱式海洋動物DNAout

產(chǎn)品及特點

本產(chǎn)品是在柱式動物 DNAout（CAT#:71206）試劑盒基礎上優(yōu)化改良而得，專門針對海洋動物的基因組 DNA 提取的試劑盒，可用于魚類、蝦類、貝類、蟹類等海洋動物和水產(chǎn)動物的荃因組 DNA 提取，可以有效去除海洋動物組織中的蛋白、脂肪及其他有機化合物等雜質(zhì)。本產(chǎn)品主要特點是:

1. 使用本試劑盒提取的基因組 DNA 可適用于各種常規(guī)分子生物學操作，如:酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等試驗。

2. 操作簡單安全，1 小時內(nèi)即可獲得超純的基因組 DNA，純化過程中不需要使用苯酚氯仿等有機試劑。

3. 應用廣泛，適用于多種動物細胞和動物組織等。

4. 性價比高，質(zhì)量和國外同類試劑盒相當，價格更低。
規(guī)格及成分 成份 編號 大紙盒包裝 
柱式海洋動物 DNAout 溶液 A 130401a 15 mL 柱式海洋動物 DNAout 溶液 B 130401b 15 mL 柱式海洋動物 DNAout 溶液 C 130401c 13 mL 蛋白酶 K 溶液(20 mg/mL) 80911 1 mL 硅膠模離心吸附柱 60911 50 個 專用洗柱液 130401d 15 mL 專用 DNA 洗脫液 130401e 15 mL 使用手冊 130401sc 1 份

運輸及保存 常溫運輸和保存，但蛋白酶 K 溶液(20 mg/mL)需要低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 無水乙醇、RNase A 溶液（100mg/mL）

使用方法 

注意：使用前請先在柱式海洋動物 DNAout 溶液 C 中加入 17mL 自備的無水乙醇，在專用洗柱液中加入 60mL 的自備無水乙醇。

1. 切取不多于 30 mg 的海洋動物組織材料，放入裝有 200 μL 柱式海洋動物 DNAout 溶液 A 的離心管中，渦旋振蕩 15 秒。注意：根據(jù)提取的組織不同，起始量也稍有不同，腮的細胞量較大，一般建議提取量不超過20 mg。如果需要去除 RNA，可加入 40 μL RNase A（10 mg/mL）溶液（客戶自備，本公司該產(chǎn)品的編號是 CAT#：3160），振蕩 15 秒，室溫放置 5 分鐘。

2. 加入 20μL 蛋白酶 K 溶液(20 mg/mL)，渦旋混勻，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。在 56℃下放置，直至海洋動物組織完全溶解，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠，再進行下一步驟。注意：不同動物組織裂解時間不同，通常需 0.5-2 小時即可完成。扇貝組織 0.5 小時基本可裂解完全，蝦和魚類組織 1 小時。每小時振蕩混合樣品 2-3 次，每次振蕩混勻 15秒。

3. 加入 200μL 柱式海洋動物 DNAout 溶液 B，充分顛倒混勻，70℃放置10 分鐘，溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。注意：加入柱式海洋動物 DNAout 溶液 B 時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般 70℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不純。

4. 在混合液中加入 200μL 無水乙醇，充分顛倒混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

5. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個硅膠膜離心吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm（~13,400×g）離心 30 秒，倒掉廢液，將吸附柱放回收集管中。

6. 向離心吸附柱中加入 500 μL 柱式海洋動物 DNAout 溶液 C，13,000rpm（~13,400×g）離心 30 秒，倒掉廢液，將吸附柱放入收集管中。

7. 向吸附柱中加入 600 μL 專用洗柱液，12,000 rpm（~13,400×g）離心 30 秒，倒掉廢液，將吸附柱放入收集管中。

8. 重復上步操作一次。

9. 將硅膠膜吸附柱放回收集管中，12,000 rpm（~13,400×g）離心 2 分鐘，倒掉廢液。將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的專用洗柱液。注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的專用洗柱液去除，否則其中的乙醇殘留會影響后續(xù)的酶反應（酶切、PCR 等）實驗。

10. 將硅膠膜離心吸附柱轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50-200 μL 專用 DNA 洗脫液，室溫放置 2-5 分鐘，12,000 rpm（~13,400×g）離心 1 分鐘，將溶液收集到離心管中。注意：專用 DNA洗脫液的體積不應少于 50 μL，體積過小影響回收效率。為增加基因組DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12,000 rpm（~13,400×g）離心 1 分鐘。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用超純水做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；且 DNA 產(chǎn)物應保存在-20℃，以防 DNA降解。