柱式鼠尾DNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn) 大鼠和小鼠是重要的生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)材料，鼠尾則是小鼠佳活體樣品，常用于基因型的快速檢測。本試劑盒采用獨(dú)特的酶和緩沖體系，可以快速得高質(zhì)量、高純度的基因組 DNA。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，不需要自己準(zhǔn)備各種溶液。

2. 產(chǎn)量高，從 0.5g 鼠尾中可以提取到約 10 μg 的基因組 DNA。

3. DNA 純度高，OD260/280 一般在 1.7-1.9，片段大一般在 20 kb 以上。

4. 可用于后續(xù)的酶切、PCR、Southern 雜交、文庫構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)。

5. 本產(chǎn)品僅供科研使用。 
規(guī)格及成分 成 份 編 號 大紙盒包裝 
柱式鼠尾 DNA 提取溶液 A 121102a 50 mL 蛋白酶 K 溶液（20 mg/mL） 80911 1 mL 柱式鼠尾 DNA 提取溶液 B 121102b 15 mL（棕色瓶） 柱式鼠尾 DNA 提取溶液 C 121102c 50 mL 離心吸附柱（15 層膜） 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脫液 3.0 170603 10 mL 使用手冊 121102sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸及保存（蛋白酶 K 溶液需要低溫運(yùn)輸，-20℃保存），有效期一年

自備試劑 氯仿

1. 剪取 0.5-1cm 鼠尾（約 15-30mg），盡量剪短成的 1mm 左右小段，放入干凈的 1.5 mL 塑料離心管中。若不需要立即使用，可以在液氮中或-80℃長期放置，或-80℃放置數(shù)天。如果是動(dòng)物心，肝、腎、脾和肌肉等組織，則取 30mg左右并充分剪碎。

2. 加入 1 mL 柱式鼠尾 DNA 提取溶液 A 和 20 uL 蛋白酶 K 溶液（20 mg/mL），37℃保溫 10 小時(shí)（一般過夜保溫就可以）。也可以放置于 65℃金屬浴或水浴中保溫 2 小時(shí)，其間每間隔 10 分鐘渦旋混勻一次（或用手指用力彈擊離心管底部數(shù)次）以幫助鼠尾酶解。對于老年小鼠鼠尾，可以適當(dāng)增加酶解時(shí)間到3-4 小時(shí)。如果有溫控混合器使反應(yīng)體系始終處于搖晃狀態(tài)。，則效果更佳。

3. 加入 0.3 mL 的柱式鼠尾 DNA 提取溶液 B 和 0.2 mL 的自備氯仿，振蕩器上振蕩 30 秒充分混勻。

4. 12,000 rpm 室溫離心 3 分鐘，小心將上清轉(zhuǎn)移到新的 1.5 mL 塑料離心管中。

5. 在上清液中加入等體積的柱式鼠尾 DNA 提取溶液 C，上下顛倒 30 秒充分混勻。

6. 將混合液分兩次轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。每次是先將 0.7-0.8 mL 混合液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12,000 rpm 室溫 1 分鐘，棄穿透液。再把剩余的一半上柱，重復(fù)此操作。

7. 將 0.7 mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中，12,000 rpm 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

8. 將 0.3 mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中，12,000 rpm 離心半分鐘（此步為第二次洗滌，一般可以省略）。

9. 空甩離心吸附柱半分鐘去除殘留液體。

10. 將離心吸附柱放置在一新的 1.5 mL 塑料離心管中，加入 30-50 uL DNA 洗脫液 2.0。

11. 12,000 rpm 離心 1 分鐘，管底即為 DNA 溶液，可立即用于 PCR，也可長期保存在－20℃。