大提無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是整合北京基因經(jīng)典法大提質(zhì)粒DNAout和菌體內(nèi)毒素清除劑兩產(chǎn)品而成。菌體內(nèi)毒素清除劑是基因推出的產(chǎn)品，在質(zhì)粒提取前就把細(xì)胞壁上的內(nèi)毒素清除掉，徹底避免了目前通用的先提取 DNA+內(nèi)毒素混合物，再?gòu)闹屑兓|(zhì)粒 DNA 的弊端。用本產(chǎn)品提取的質(zhì)粒 DNA，內(nèi)毒素的污染濃度低，適合于轉(zhuǎn)染等對(duì)內(nèi)毒素的污染敏感的實(shí)驗(yàn)。

1. 操作簡(jiǎn)單，只在經(jīng)典的柱式質(zhì)粒 DNA 提取前，增加菌體內(nèi)毒素清除一步。

2. 去內(nèi)毒素效果好，處理一次可以去除 99%以上的內(nèi)毒素。

3. 質(zhì)粒丟失少，產(chǎn)率只比柱式質(zhì)粒 DNAout 低 5-10%，效果好于先提質(zhì)粒DNA，再用液相內(nèi)毒素清除劑處理的方法。

4. DNA 可以直接用于轉(zhuǎn)染等實(shí)驗(yàn)。
規(guī)格及成分 注意：本產(chǎn)品為菌體內(nèi)毒素清除劑（90901）和大提質(zhì)粒 DNAout（80912） 兩獨(dú)立產(chǎn)品的組合。
成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝 菌體內(nèi)毒素清除劑 90901 200 mL 溶液 A 60205a 26 mL 溶液 B 60205b 26 mL 溶液 C 60205c 36 mL RNase A 溶液（10 mg/mL） 3160 0.6 mL 大提離心吸附柱 90303 5 套 通用洗柱液 60408 50 mL×2 DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL 使用手冊(cè) 81107sc 1 份

運(yùn)輸及保存 RNase A 溶液需要低溫運(yùn)輸、-20℃保存，其余成分可常溫運(yùn)輸、室溫或保存，如有沉淀可加熱溶解后再使用。

自備試劑 50 mL 收集管

使用方法

1. 用 50 mL 塑料離心管收集不超過(guò) 40 mL 的 E.coli 飽和菌液，5,000 rpm離心 5-10 分鐘，棄上清，得到細(xì)菌沉淀。

2. 加入 10 mL 菌體內(nèi)毒素清除劑，溫和混勻后 5,000 rpm 離心 5-10 分鐘，棄上清（含內(nèi)毒素）。一次洗滌可以去除細(xì)菌表面 99%的內(nèi)毒素。

3. 再重復(fù)上述操作 1-3 次，得到的菌體將丟失了絕大部分細(xì)胞表面的內(nèi)毒素。

4. 往細(xì)菌沉淀中加入 5 mL 溶液 A（一次使用時(shí)需要將 RNase A 溶液全部加入并混合均勻，未用完的部分放 4℃保存），充分振蕩懸浮。注意：充分重懸細(xì)胞沉淀（無(wú)塊狀物）對(duì)于獲得高的質(zhì)粒產(chǎn)量十分重要。

5. 加 5 mL 溶液 B，溫和翻轉(zhuǎn) 10 余次至透明。若混合液不透明，應(yīng)減少細(xì)菌的用量或室溫放置 5-10 分鐘直到裂解液變透明。注意: 避免劇烈振蕩，否則細(xì)菌基因組 DNA 將斷裂為小片段，與質(zhì)粒難以分離，污染質(zhì)粒 DNA。

6. 加入冰浴的 7 mL 溶液 C，顛倒混勻，冰上放置 10 分鐘?；旌衔镏袑⒂邪咨鯛钗镄纬?。注意不要過(guò)分振蕩。

7. 6000 rpm 離心 10 分鐘。如果離心管承受能力強(qiáng)，離心速度還可以適當(dāng)提高以充分沉淀絮狀物。

8. 將上步得到的上清液移入到大提離心吸附柱中，放入 50 mL 收集管中。室溫放置 5 分鐘左右以便讓質(zhì)粒 DNA 跟膜結(jié)合。

9. 6000 rpm 離心 5 分鐘，質(zhì)粒 DNA 將與大提離心吸附柱中的膜結(jié)合。棄穿透液。

10. 將 10 mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置 2 分鐘后 6000 rpm離心 5 分鐘，棄穿透液。

11. 重復(fù)上步一次。

12. 室溫 6000 rpm 空甩 5 分鐘，棄穿透液。注意：此步很重要，不能跳過(guò)，否則殘留乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

13. 將大提離心吸附柱放入一個(gè)干凈的 50 mL 塑料離心管中，加 0.5 mL DNA洗脫液 2.0（洗脫液如加熱到 50-65℃效果更佳），室溫靜置 2 分鐘后6000rpm 離心 5 分鐘，收集液即是質(zhì)粒 DNA 溶液。

14. 重復(fù)上步 3-4 次可洗脫更多的質(zhì)粒 DNA。DNA 洗脫液 2.0 不夠可以用 TE或超純水替代。

15. 合并所得質(zhì)粒 DNA，立即使用或-20℃儲(chǔ)存。