超級雜交液（芯片雜交用）

產(chǎn)品及特點基因芯片是將大量靶基因（DNA 片段）有序地、高密度地點在玻璃片或 硅片或塑料片上等載體上所形成的矩陣?；蛐酒s交一般情況下是將待測 的兩種樣品（主要是 RNA 樣品）分別用 Cy3 和 Cy5 兩種熒光染料標(biāo)記，制 備成探針與芯片雜交，雜交信號用激光掃描儀檢測，計算機分析檢測結(jié)果， 可獲得類似與傳統(tǒng)的點雜交的雜交數(shù)據(jù)，以達到快速、高效、高通量及平行 性的分析表達譜的目的。本產(chǎn)品為即用型芯片專用的雜交液，可用于各種標(biāo) 記的探針（主要是 Cy3 和 Cy5 標(biāo)記的 RNA 探針）跟基因芯片的雜交實驗
規(guī)格及成分 成分 編號 熱封袋包裝 
本產(chǎn)品 LM130905 10 mL
使用手冊 1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 印跡膜、去離子水、20×SSC 

使用方法一、預(yù)雜交（下面的操作以載玻片為例）

預(yù)雜交的主要作用是在加入標(biāo)記探針之前從載玻片上洗去未結(jié)合的靶基 因（靶 DNA），同時封閉載玻片表面可能與標(biāo)記探針進行非特異性結(jié)合的反 應(yīng)性基團（如自由氨基），從而降低非特異的背景。所有的預(yù)雜交、雜交、 雜交后洗滌都在 Coplin 染缸或者顯微鏡載玻片盤等雜交盒中進行。

1. 在室溫下，將載玻片浸入裝有本產(chǎn)品的雜交盒中（本產(chǎn)品的用量根據(jù)雜 交盒的大小決定，以能夠浸埋載玻片為準(zhǔn)）。將雜交盒在 42℃水浴中放 置 30～45 分鐘，無需震動。

2. 在室溫下用去離子水清洗載玻片數(shù)次。

3. （可選）用 100異丙醇（HPLC 級）漂洗載玻片。

4. 在加入雜交溶液之前，空氣晾干或者通過離心（室溫下以 2000g 離心 5 分鐘，有陣列的一面朝外）干燥載玻片，將干燥后的載玻片立即用于雜 交。如果載玻片干燥時間超過 1 小時，雜交效率可能會迅速下降。

二、雜交

1. 將等同于至少 1 ug polyA RNA 或 100 ug 總 RNA 的 Cy3 和 Cy5 標(biāo)記 的探針 RNA 混合在一起，最終體積約為 6 μL。如果沒有這么多的，則 需要進行 RNA 擴增。

2. 將 6 μL 標(biāo)記 DNA 和 30uL 本產(chǎn)品在塑料離心管中混合，得到雜交液。

3. （可選）將雜交液在微量離心機中 10,000 g 離心 5 分鐘，然后將上清液 轉(zhuǎn)移到新的塑料離心管中。本步驟以去除靶序列純化過程中帶入的微量 玻璃纖維和其他高分子質(zhì)量的顆粒。

4. 將上清液在 100℃下加熱 2 分鐘，然后在 30℃水浴中冷卻 30 秒。加熱 混合液可以降低背景。不要將溶液放置在冰上，因為可能會有沉淀析出。

5. 將適量的雜交溶液加到 DNA 微陣列上，再小心的蓋上蓋玻片，蓋玻片和 DNA 微陣列之間不能有氣泡。

6. 將載玻片置于一個空的移液器吸頭盒的上層，下層裝 5 mL 自備的 3×SSC，蓋上蓋子即得潮濕的環(huán)境。由于雜交是在很小的體積下進行的， 在密閉的潮濕保持適當(dāng)?shù)碾s交適度非常重要，過分干燥則蓋玻片會粘附 在 DNA 微陣列上，背景會很高；過于潮濕則冷凝的液體會進入蓋玻片區(qū) 域，降低雜交信號。

7. 在 42℃下將載玻片溫育 14~16 小時

三、雜交后的清洗。注意在下面的所有操作過程中，一定不要讓載玻片干燥。 

1. 雜交完畢，拆卸雜交盒。如果雜交盒是浸入水浴中的，在松開螺絲之前， 仔細擦干水痕，尤其是兩個半片盒子之間的水痕。

2. 從雜交盒中取出載玻片，浸沒于大量的 0.5×SSC（含 0.01 % SDS） 溶液中，直到蓋玻片分離。

3. 蓋玻片除去后，將載玻片放到玻片夾持器上，然后浸入裝有約 250 mL 0.5×SSC（含 0.01 % SDS）溶液的避光容器中。將容器放在軌道振蕩 器上，并將載玻片振蕩 2 分鐘。

4. 將載玻片和夾持器一起浸入到另一個裝有約 250 mL 0.5×SSC 溶液的 容器中，再次將載玻片振蕩 3 分鐘。

5. 將載玻片和夾持器一起浸入到另一個裝有約 250 mL 0.1×SSC 溶液的 容器中，再次將載玻片振蕩 3 分鐘。

6. 重復(fù)上一步 2 次，每次清洗 1 分鐘。

7. 快速（<10 秒）將載玻片和夾持器一起浸入到另一個裝有約 250 mL 0.01 ×SSC 溶液的容器中，立即將載玻片放到鋪有 3M Whatman 濾紙的離 心機微量滴定板夾持器中。低速離心約 5 分鐘迅速干燥玻片。

8. 將載玻片放置在避光的盒子內(nèi)直到準(zhǔn)備掃描。（盡量在當(dāng)日內(nèi)進行掃描， 因為隨著時間的延長信號會降低）