上海康朗生物科技有限公司
主營產(chǎn)品: 生化試劑, 標準品, ELISA試劑盒, 化學(xué)試劑, 分析試劑
cDNA第二鏈合成試劑盒-KLANG
價格
訂貨量(瓶)
¥897.00
≥1
¥867.00
≥5
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生產(chǎn)廠家
所在地區(qū)
上海市閔行區(qū)
主營產(chǎn)品
cDNA第二鏈合成試劑盒
產(chǎn)品及特點cDNA 第二鏈合成的原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 雜合鏈中的 RNA 產(chǎn)生切口,再用 DNA Polymerase I 通過切口平移(nick translation)反應(yīng)進行RNA 鏈取代合成 cDNA 第二鏈,其示意圖如下:
本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,含有合成 cDNA 第二鏈的所有試劑(包括 RNase H、E.coli DNA聚合酶 1 和 DNA ligase。
2. 一管式操作,不需要每次進行純化,不丟失寶貴德樣品。
3. 所得雙鏈 cDNA 可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、cDNA 文庫構(gòu)建、抑制性差減雜交等。
4. 本試劑盒足夠 30 次 80uL 體系的 cDNA 第二連合成反應(yīng)。
規(guī)格及成分 成分 編號 十孔盒包裝
5×cDNA 第二鏈合成緩沖液 131005a 250 μL
20×cDNA 第二鏈合成酶混合液 131005b 60 μL
0.5 M EDTA 溶液 130309 60 μL
超純水 100935 1 mL
使用手冊 131005sc 1 份
運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。
自備試劑 cDNA 一鏈合成試劑等
使用方法 一、合成 cDNA 一條鏈
本試劑盒不提供 cDNA 一鏈合成試劑,用戶需自備相關(guān)試劑合成 cDNA一鏈。
二、合成 cDNA 第二鏈
1. 在冰浴上向 5uL 已經(jīng)完成 cDNA 一條鏈合成的反應(yīng)體系(逆轉(zhuǎn)錄體系)中依次加入下表試劑,如果多于 5uL,請只取用 5uL:
成分 用量
超純水 25 μL
cDNA 第二鏈合成緩沖液 8 μL
cDNA 第二鏈合成酶混合液 2 μL
共 40uL,輕柔吹打混勻后,短暫離心,16℃保溫 2 小時
自備的 T4 DNA 聚合酶(見注) 1 μL
輕柔吹打混勻后,16℃繼續(xù)保溫 30 分鐘
0.2M EDTA 溶液 2 μL
注:克隆雙鏈 cDNA 一般需要平末端化,需要此步處理。PCR、SSH 等后續(xù)處
理一般不需要把雙鏈 cDNA 平末端化,則可以跳過 T4 DNA 聚合酶處理步驟,
直接用 EDTA 終止反應(yīng)。
2. 電泳 5 μL 檢測 cDNA 質(zhì)量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范圍內(nèi)呈模糊一片,則 cDNA 合格。如果沒看見 cDNA 或有其他異常,需查找原因后再繼續(xù)。
3. 所得 cDNA 可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、cDNA 文庫構(gòu)建、抑制性差減雜交(SSH)等實驗。
采購數(shù)量不能為空
聯(lián)系信息不能為空
驗證碼不正確