大腸桿菌TG1化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是采用大腸桿菌 TG1 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可直接用于 DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。

本試劑盒具有下列特點(diǎn)：

1. 使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108，-80℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不改變。

2. 可用于高效轉(zhuǎn)化 150Kb 大小的質(zhì)粒，可用于藍(lán)白斑篩選。

3. 本產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，質(zhì)優(yōu)價(jià)廉。

號(hào)及其含義列表如下：

基因型符號(hào) 含義

K-12

K-12系的所有菌種默認(rèn)都攜帶F因子和?、e14、rac

三種原噬菌體。其中的e14攜帶野生型mcrA基因，

其產(chǎn)物可對(duì)甲基化的CG切割。

F'[traD36

proAB+ lacI

q

lacZΔM

15]

本菌株攜帶的F因子上還攜帶下列染色體基因：突變

的traD36基因，使菌株能夠發(fā)生結(jié)合但F因子轉(zhuǎn)移

能力喪失；野生型proAB

+使菌株可以合成脯氨酸；

突變的lacI

q使得lac抑制蛋白過表達(dá)，降低lac啟動(dòng)

子的背景表達(dá)； lacZ△M15的?-半乳糖苷酶基因

可與攜帶?片段的質(zhì)?；パa(bǔ)恢復(fù)酶活性，用于藍(lán)白斑

篩選

△(lac-proAB )

缺失lac操縱子和脯氨酸合成基因，不能合成?-半乳糖苷酶和脯氨酸hsd△5

EcoK系統(tǒng)的甲基化酶失活，不會(huì)甲基化Eco位點(diǎn)的AsupE

同glnV，使得終止子UAG編碼谷氨酰胺，減輕UAG

突變（琥珀突變）的傷害

thi-1 不能合成硫氨（維生素B1）

規(guī)格及成分 成分 編號(hào) 小扁盒包裝

大腸桿菌 TG1 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 LM80701 0.1 mL×10

使用手冊(cè) LM80701sc 1 份

4. 大腸桿菌 TG1 菌株基因型是 K-12, supE,thi-1,Δ(lac-proAB), Δ(mcrB-hsdSM)5, (rK -mK - ), F' [traD36 proAB+ lacI q lacZΔM15]。
規(guī)格及成分 成分 編號(hào) 小扁盒包裝 
大腸桿菌 TG1 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 80701 0.1 mL×10
使用手冊(cè) 80701sc 1 份

運(yùn)輸及保存 干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑 目的 DNA、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等

使用方法

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以 50 μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。

2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的 DNA，通常 100 μl 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。

3. 42℃熱擊 90 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。

4. 每個(gè)離心管中加入 450 μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150 rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘使菌體復(fù)蘇。

5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含有相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于 37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。

注意：

1. 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少，可通過離心（4,000 rpm ，2 分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。

2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。