基本原理 先用隨機引物將 RNA 反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，然后設計特異性的引物和熒光探針(TaqMan 探針),進行 熒光定量 PCR 檢測。TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它設計為與目標序列上游引物和下游引物 之間的序列配對。熒光基團連接在探針的 5’末端，而淬滅劑則在 3’末端。當完整的探針與目 標序列配對時，熒光基團發(fā)射的熒光因與 3’端的淬滅劑接近而被淬滅，但在進行延伸反應時， qTaq 聚合酶的 5’外切酶活性將探針進行酶切，使得熒光基團與淬滅劑分離,熒光強度得到檢測。 隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累，因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關系。