牛內(nèi)皮素(ET)ELISA檢測試劑盒檢測原理：

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被樣本抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

應該做哪些準備呢？

1. 洗滌緩沖液制備：先將洗滌濃縮液平衡至室溫，充分混勻，然后吸取50ml濃縮液與1950ml的去離子水混勻，即得。配制的洗滌液應保存于冰箱內(nèi)，并于2周內(nèi)用完

2. 標記抗體的制備：用標記抗體稀釋液將標記抗體稀釋30倍，即得。

例：如果只測一條板，8孔，則需要標記抗體800ul（30ul的標記抗體濃縮+870ul的標記抗體稀釋液，混勻，使用時每孔加100ul）

此步驟在實驗前完成

剩余的標記抗體濃縮應裝于密封瓶內(nèi)，保存在4℃

3. 標準品的制備：吸取0.5ml的去離子水至標準品瓶內(nèi)，充分混勻，得到140ng/ml的人COX-2標準品

4. 標準品的稀釋：準備8個試管用于標準品的稀釋，每管加入230ul的EIA緩沖液

每管的濃度如下

1號管 70 ng/ml

2號管 35ng/ml

3號管 17.5ng/ml

4號管 8.75ng/ml

5號管 4.38ng/ml

6號管 2.19ng/ml

7號管 1.09ng/ml

8號管 0pg/ml（試驗樣品空白）

吸取230ul的標準品于1號管混勻，然后從1號管吸取230ul加入2號管，依次連續(xù)稀釋，標準品范圍為70~1.09ng/ml

緩沖液稀釋

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友情提醒：試劑盒使用完畢后，請妥善處理相關耗材，避免環(huán)境污染！

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