產(chǎn)品名稱：禽流感病毒H9亞型(AIV-H9)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PC

檢測(cè)方法： 實(shí)時(shí)熒光 PCR

規(guī)    格： 50T

保存方式： 2~8℃

有 效 期： 1年

產(chǎn)    地： 中國(guó)

用    途： 僅用于科研實(shí)驗(yàn)

訂購(gòu)流程禽流感病毒H9亞型(AIV-H9)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PC

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ELISA常見(jiàn)問(wèn)題：禽流感病毒H9亞型(AIV-H9)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PC

利用ELISA進(jìn)行檢驗(yàn)常見(jiàn)的樣本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。

1、抗原：ELISA抗原有三類：液體中純化的自然抗原、合成抗原和基因重組抗原。

純度不高可導(dǎo)致試劑盒的特異性不強(qiáng)，合成抗原一般都是多肽抗原，

試劑盒一般為基因重組抗原?？乖兌炔桓?，特異性就不強(qiáng)，

2、抗體特異性和親和力的大小會(huì)影響試劑盒的特異性和敏感性

3、酶結(jié)合物，試劑盒的保存時(shí)間通常由酶的穩(wěn)定性決定。

最常用的就是辣根過(guò)氧化酶-HRP.其他還有堿性磷酸酶和β半乳糖苷酶。

ELISA溫浴和洗滌一般為磷酸鹽緩沖液（PBS）

堿性磷酸酶的話就不能用PBS洗滌了，因?yàn)闅埩舻腜BS會(huì)抑制一半的酶活性。

TMB顯色液取代了OPD為HRP最常用的色原底物。為氧化還原反應(yīng)（OPD對(duì)機(jī)體有突變作用，所以改用TMB）

結(jié)果分析判定

結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置基線（baseline）：一般情況下，對(duì)ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle，對(duì)PE5700設(shè)為3-15cycle,對(duì)MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對(duì)基線適當(dāng)調(diào)整。
設(shè)置閾值（threshold）:以閾值線剛超過(guò)陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線（無(wú)規(guī)則的噪音線）的zui高點(diǎn)。
結(jié)果判斷
陽(yáng)性：檢測(cè)樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期；
可疑：檢測(cè)樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復(fù)一次實(shí)驗(yàn)，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期，為陽(yáng)性，否則為陰性；
陰性：檢測(cè)不到樣本Ct值或Ct值為40

實(shí)驗(yàn)操作

1.模板制備（樣本制備區(qū)）
建議使用配套水生動(dòng)物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過(guò)程詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書。
2.添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒上進(jìn)行）
剪下所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板，順序?yàn)?/span>NG、待測(cè)樣品模板、PG-VH-P。蓋好配套的PCR管蓋后，渦旋混勻30s，離心1min，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
3. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）
使用熒光定量PCR儀，熒光基團(tuán)選擇FAM，淬滅基團(tuán)選擇TAMRA。

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