轉基因植物cry1A基因檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
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上海市奉賢區(qū)
產(chǎn)品名稱:轉基因植物cry1A基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
包裝:48T
分類:pcr-熒光試劑盒
用途:本產(chǎn)品僅供科研與實驗使用,不用于臨床診斷等
目的:本試劑盒適用于檢測疑似感染者或發(fā)病動物等組織、體液或淋巴結等標本中禽流感病毒rna,用于禽流感病毒感染的輔助診斷,其檢測結果僅供參考。
轉基因植物cry1A基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。
轉基因植物cry1A基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 設置 RT-PCR 反應(30 uL 體系)
在PCR 管中加入下列成分:
成份 |
樣品 |
陽性對照 |
陰性對照 |
雙酶一管式 RT-PCR Buffer, 2× | 15 uL | 15 uL | 15 uL |
EMCV 專一性引物對 | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
樣品 RNA | 1-5 uL | 無 | 2 uL |
EMCV 陽性對照 | 無 | 2 uL | 無 |
補超純水到 | 28 uL | 28 uL | 無 |
MMLV-Taq Mix | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
[1] 輕柔混勻后上機,按下面參數(shù)進行 RT-PCR。
轉基因植物cry1A基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)電泳檢測RT-PCR 產(chǎn)物。預期的PCR 產(chǎn)物長度為 286 bp。
轉基因植物cry1A基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 【參考值(參考范圍)】
結果判定
1 結果分析條件設定 閾值設定原則:閾值線設定于剛好超過陰性對照擴增曲線的點。不同儀器可根據(jù)儀器噪音
情況進行調整。
2 結果描述及判定
陽性對照 Ct 值≤30 并出現(xiàn)特定的擴增曲線,陰性對照無 Ct 值并且無特定擴增曲線,實驗結果成 立;被檢樣品 Ct 值≤30 并出現(xiàn)特定的擴增曲線為 AIV 陽性;被檢樣品 30<Ct<37 并出現(xiàn)特定的擴 增曲線,需重新取樣提取 RNA,擴增后進行結果判定,如仍是可疑,可判定為陽性;被檢樣品 Ct 值≥37 時,超過本方法檢測靈敏度范圍,判定為陰性;對于某些未呈現(xiàn) S 型曲線,但本底較高的樣 品,應為陰性。