大鼠肉毒堿乙酰轉移酶(CRAT) ELISA Kit

檢測原理：

博爾森生物（BIOESN）生產的ELISA試劑盒采用抗體夾心法:將抗某蛋白抗體包被于酶標板上，標本和標準品中的某蛋白與抗體結合，加入生物素化的抗某蛋白抗體，再加入SABC復合物與生物素抗體結合，形成免疫復合物，然后加入TMB顯色底物，顯色劑顯藍色，最后加終止液變黃色，游離的成分被洗去。在450 nm處測OD值，某蛋白濃度與OD值之間呈正比，可通過繪制標準曲線計算出標本中某蛋白的濃度。

試劑盒組分: （保存溫度4℃）

本試劑盒用于血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)上清液及其它生物體液。

標本收集與試劑準備: 

1. 血清、血漿樣本收集應使用一次性的無熱原，無內毒素試管（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝均可），血清、血漿避免使用溶血，高血脂標本，標本懸浮物應離心去除，使標本清澈透明。待測樣本應盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-80℃）保存，避免反復凍融。

2. 洗滌液配置：用蒸餾水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的蒸餾水）

3. 標準品配制：取7個1.5ml離心管，分別標注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。從第一至七管中分別加入標準品/樣品稀釋液200ul。在第一管中加入標準品溶液200ul，置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出200ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第六管中吸出200ul棄去，第七管為空白對照。

4. 

5. 生物素化抗體工作液配置:使用前20分鐘，用生物素化抗體稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×工作液，根據(jù)所需用量配置，當日使用，剩余棄之。

6. TMB顯色液的配置：使用前10分鐘，將TMB顯色液A液和B液1：1混合，避光放置備用。

7. 如果您檢測的樣本中靶蛋白濃度高于標準品最高值，建議重新檢測，請根據(jù)實際情況，適當倍數(shù)稀釋(建議做預實驗，以確定稀釋倍數(shù))。

檢測程序:

1. 加樣：空白孔加入50μl標準品/樣品稀釋液，其余孔各加入標準品或待測樣品50ul，將反應板混勻后置37℃，40分鐘。

2. 洗板：用1×洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震蕩/浸泡1-2分鐘，向濾紙上印干。

3. 空白孔加入100ul生物素化抗體稀釋液，其余孔各加入1×的生物素化抗體工作液100ul，混勻后置37℃，30分鐘。

4. 洗板：同上。

5. 每孔加入SABC復合物工作液100ul，混勻后置37℃，20分鐘。

6. 洗板：同上。

7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混勻后置37 ℃暗處反應10-20分鐘（具體顯色時間根據(jù)顯色結果而定）。

8. 每孔加入100ul終止液，混勻，30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

結果判斷與計算：

1. 所有OD值建議減除空白值后再行計算，如空白OD低于0.1，也可以直接計算。

2. 以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，手工繪制或用軟件繪制標準曲線，根據(jù)樣品OD值計算出相應含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。

試劑盒性能:

1、 檢測范圍:1.56-100ng/mL

2、 特異性:同時可檢測重組或天然的某種蛋白或抗體，不與其它細胞因子有交叉反應。

3、 重復性:板內，板間變異系數(shù)均小于10%。

注意事項

1. 在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙孔檢測，每次檢測都應做標準曲線。

2. 洗滌過程很關鍵，洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高，從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能 有結晶,屬于正?，F(xiàn)象，37℃水浴使結晶完全溶解后再配制洗滌液。

3. 檢測時所有試劑都要恢復到室溫，板條開封后剩余板條需封好，放回袋中2 個月內用完。

4. 試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會出現(xiàn)絮狀物，屬正?，F(xiàn)象，不影響結果判讀。

5. 僅用于科研，不能用于臨床診斷！