加強(qiáng)型RIPA裂解液       C1053+

描述： 加強(qiáng)型RIPA裂解液加強(qiáng)型對(duì)動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分有較強(qiáng)裂解作用，是常用的細(xì)胞組織快速裂解液。使用加強(qiáng)型RIPA 裂解液特別適于提取膜蛋白以及western blot和大多數(shù)蛋白-蛋白相互作用的實(shí)驗(yàn)等。

儲(chǔ)存：4 ℃保存  12個(gè)月有效

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物

1.      800g 4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，估計(jì)細(xì)胞離心后的體積（PCV, 10⁶ cells=~20 ml, 10⁷ cells =~100 ml PCV）；

2.      每50-100 ml PCV加入5倍體積RIPA裂解緩沖液（250-500 ml）,冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

3.      12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物；

4.      假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物。

制備組織裂解產(chǎn)物

1.      取50-100 mg組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；

2.      加入 0.5-1 ml 預(yù)冷 RIPA 裂解緩沖液；

3.      4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細(xì)胞被破碎，然后在冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

4.      12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；

5.      假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，95℃加熱5分鐘，然后迅速冰浴5分鐘，12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；

6.      20％的甘油保存于 -70^oC 或-20^oC。

注意：

1.      在轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物；

2.      在做免疫沉淀或免疫共沉淀時(shí)最好在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行蛋白的提取，以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；

3.      在該RIPA裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑。