SDS-PAGE凝膠配制試劑盒 (SDS-PAGE Gel kit)  B1027

描述：本產(chǎn)品提供了配制SDS-PAGE凝膠所需的各種試劑，用戶只需自備制膠器具和蒸餾水，即可配制高質(zhì)量的各種濃度的變性PAGE膠，方便，快捷。本試劑盒至少可以配制30塊常規(guī)大小的PAGE膠，并且其中的分離膠緩沖液和濃縮膠緩沖液中已加入10%SDS，使用時無需另外加入。

組成：

產(chǎn)品名稱	包裝	保存條件
30%Acr-Bis（29:1）	100 ml	2-8℃ 避光
分離膠緩沖液	80 ml	室溫
濃縮膠緩沖液	25 ml	室溫
APS（過硫酸銨）	0.5 g	室溫
TEMED	1 ml	室溫、避光

*試劑盒中提供的APS（過硫酸銨）為固體粉末，使用前加入雙蒸水溶解即配制成10%APS（0.5 g APS加入5 ml雙蒸水），將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。

操作步驟：根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度，不同濃度的SDS-PAGE分離膠的最佳分離范圍參考附表1。

1．灌制分離膠（試劑使用量參考附表2）

（1）參照凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。

（2）將不同體積的30%Acr-Bis（29:1）、分離膠緩沖液和雙蒸水在小燒杯中混合。

（3）加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

（4）將分離膠溶液灌入凝膠玻璃槽中，然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3cm的水層，用于壓平液面。

（5）靜置30-60min，至分離膠凝固。

2．灌制濃縮膠（試劑使用量參考附表3）

（1）去除覆蓋在分離膠上的水層，并用濾紙吸干，水份吸不干，可能會導(dǎo)致濃縮膠和分離膠分開。

（2）將不同體積的30%Acr-Bis（29:1）、分離膠緩沖液和雙蒸水在小燒杯中混合。

（3）加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

（4）將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，插入樣品梳，避免產(chǎn)生氣泡，靜置20-30min，直至濃縮膠聚合。

（5）待凝膠聚合后，小心拔下梳子，以免破壞加樣孔。

（6）進行常規(guī)電泳。

注意事項：

1.10%APS配置好后，應(yīng)當(dāng)-20℃保存，并且應(yīng)盡量減少室溫存放時間，以防失效。

2.TEMED易揮發(fā)，使用后請擰緊瓶蓋。

3.凝膠凝聚的速度與溫度等關(guān)系密切，可通過調(diào)節(jié)APS和TEMED的用量，控制凝膠的聚合速度，凝膠聚合過快不利于操作。

4.丙烯酰胺，TEMED等有毒，操作時請穿實驗服并戴手套。

5.在凝膠配制過程中，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡。

6.在分離膠上層加蒸餾水時要小心操作，加水時速度不宜過快。