路博便攜式微生物檢測儀可以檢測總大腸菌群產(chǎn)品簡介：

飲用水微生物污染是我國最大的健康危害問題之一，特別是在貧困地區(qū)，或地質(zhì)災(zāi)害過后發(fā)生的次生災(zāi)害等，微生物超標(biāo)將導(dǎo)致傳染病的發(fā)生。

城市自來水一般經(jīng)過沉淀、過濾及消毒等處理，含有的微生物較少，但當(dāng)處理工藝不合理或者處理過程中造成污染等都會導(dǎo)致生活用水的二次污染，因此，加強(qiáng)生活飲用水的日常檢測十分必要。微生物檢測是生活污水監(jiān)測中的重要內(nèi)容。

根據(jù)《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB5749-2006）中的水質(zhì)常規(guī)指標(biāo)，微生物指標(biāo)中一般檢測總大腸菌群和細(xì)菌總數(shù)兩項(xiàng)指標(biāo)，當(dāng)檢出總大腸菌群時(shí)，需進(jìn)一步檢測耐熱大腸菌群和大腸埃希氏菌。

它被設(shè)計(jì)成使用現(xiàn)場準(zhǔn)備好的硬件和測試程序，可以檢測飲用水的微生物情況或排放污水的微生物情況。

一、收集待測水樣

收集待測水樣的用的器具，在取樣前必須進(jìn)行滅菌，滅菌可用甲醇、乙醇或火焰滅菌槍來滅菌，滅菌槍滅菌溫度可達(dá)1200℃。取時(shí)還需用待測水樣對滅菌樣品杯進(jìn)行潤洗，這樣做可去除任何在滅菌過程中可能殘留在杯子表面的甲醇或乙醇。

取水樣時(shí)注意事項(xiàng)如下:

1）取樣時(shí)應(yīng)注意不要讓原水中的任何漂浮物流入杯中。

2）當(dāng)從河流或溪流中取樣時(shí)，盡可能從接近水流主體的位置取樣，而不要過于接近岸邊，因?yàn)榘哆吽鹘跬?，水樣不具有良好的代表性?/span>

3）當(dāng)從水龍頭或飲用水取水口處取樣時(shí)，需移除出水部位所有附屬物，用清潔的干布擦拭出水部位，然后讓水流超過1分鐘后，再進(jìn)行取樣；

水樣采集后應(yīng)立即或盡快進(jìn)行處理，便攜式的現(xiàn)場檢測設(shè)備使其成為可能。如果樣品采集后2-6小時(shí)以內(nèi)無法進(jìn)行檢測，則需將水樣置于隔熱容器中，用冰塊快速降溫至4℃。經(jīng)降溫處理的水樣在進(jìn)行培養(yǎng)前需先進(jìn)行微生物復(fù)蘇。

即便水樣低溫保存，保存時(shí)間也不應(yīng)超過6小時(shí)。未經(jīng)妥善處理保存的水樣，或是保存時(shí)間超過6小時(shí)的水樣，難以在培養(yǎng)后正確反映采樣當(dāng)時(shí)水樣的實(shí)際情況；

如果水樣有經(jīng)過氯消毒處理，則最好在樣品中加入少量流代流酸鈉，以破壞水中的余氯。

保存在低溫環(huán)境中會導(dǎo)致大腸菌群出現(xiàn)生理性抑制，需要通過復(fù)蘇過程使其恢復(fù)活力。在正式開始培養(yǎng)之前需進(jìn)行至少1-4小時(shí)的微生物復(fù)蘇過程

合理安排一天的檢測工作是很重要的，特別是當(dāng)需要進(jìn)行多點(diǎn)采樣的時(shí)候。盡可能在3個(gè)小時(shí)以內(nèi)完成所有的采樣和樣品處理工作，以保證所有樣品的復(fù)蘇時(shí)間不超過4個(gè)小時(shí)。

特別對于經(jīng)過氯消毒的水樣，復(fù)蘇過程是非常重要的。

二、便攜式微生物檢測儀制備樣品

理想的取樣體積能夠使得菌落計(jì)數(shù)獲得最佳的準(zhǔn)確度。對于飲用水或處理后的水，要求大腸菌的數(shù)量控制在每100mL 中不得檢出，以保障用水的生物安全性足夠高（或者說風(fēng)險(xiǎn)性極低）。建議的取樣體積為 100mL。

三、滅菌程序

滅菌是必要過程可杜絕交叉污染的發(fā)生，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。在使用前對核心部件進(jìn)行滅菌是執(zhí)行任何微生物檢測操作的關(guān)鍵。需要滅菌的核心部件如下：

1) 膜過濾套件——淲膜法中，膜過濾套件必須滅菌，包括樣品杯的內(nèi)表面、過濾漏斗的內(nèi)表面以及濾膜基座在使用前必須滅菌；膜過濾套件可采用甲醇或乙醇滅菌，也可采用火焰滅菌槍來滅菌，滅菌槍滅菌溫度可達(dá)1200℃。

2） 培養(yǎng)皿——培養(yǎng)皿內(nèi)表面會在檢測過程中直接與培養(yǎng)基接觸，因此必須在使用前進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)皿可采用火焰滅菌槍來滅菌，滅菌槍滅菌溫度可達(dá)1200℃。

3） 培養(yǎng)用玻璃管——培養(yǎng)用玻璃管內(nèi)表面會在檢測過程中直接與培養(yǎng)基接觸，因此必須在使用前進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)用玻璃管可用甲醇、乙醇或火焰滅菌槍進(jìn)行滅菌，其蓋子只能用甲醇或乙醇滅菌。

4） 吸收墊——吸收墊為液體培養(yǎng)基和過濾膜提供了接觸的平臺，并被置于培養(yǎng)皿中。吸收墊采用無菌袋包裝，出廠前已經(jīng)進(jìn)行滅菌處理。

5） 培養(yǎng)基——在制備所需培養(yǎng)基時(shí)，請務(wù)必確認(rèn)用于活化培養(yǎng)基的水是無菌的。所有用于制備和儲存培養(yǎng)基的容器都應(yīng)確保無菌?；蛟趯?shí)驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)室放置于滅菌鍋中滅菌。

6） 濾膜/鑷子——濾膜會在過濾后將微生物截留在其表面。濾膜均已經(jīng)過滅菌，但必須使用經(jīng)過滅菌的鑷子進(jìn)行拿取；鑷子可采用火焰滅菌槍來滅菌，滅菌槍滅菌溫度可達(dá)1200℃。

7） 滅菌蒸餾水：將蒸餾水/純凈水燒開10分鐘并冷卻。

四、培養(yǎng)基的存儲

目前微生物培養(yǎng)基多為粉末培養(yǎng)基，保質(zhì)期為12個(gè)月。

在進(jìn)行微生物檢測時(shí)，粉末培養(yǎng)基必須制備成液體形態(tài)?？稍趯?shí)際進(jìn)行現(xiàn)場檢測的頭一天晚上，或當(dāng)天早上，預(yù)先將培養(yǎng)基制備好；

徹底滅菌后的液體培養(yǎng)基可在冰箱中保存最多 6 個(gè)月。如果僅放置在一般避光處且避熱避濕，則最多可保存 3 個(gè)月。如培養(yǎng)基出現(xiàn)任何異常變化，例如變黃色、產(chǎn)生渾濁等，均說明此培養(yǎng)基已失效不可再使用。任何情況下絕不可使用已經(jīng)污染變質(zhì)的培養(yǎng)基進(jìn)行微生物檢測。

五、濾膜法微生物檢測儀微生物檢測結(jié)果

水中的細(xì)菌通常肉眼不可見，除非結(jié)成菌團(tuán)或特定的顆粒物。當(dāng)對水中的細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，所得結(jié)果并非水中單個(gè)細(xì)菌的數(shù)量，而是可見的菌團(tuán)或特定的顆粒物。每一個(gè)菌塊或顆粒物中都可能含有眾多細(xì)菌。

膜過濾和菌落計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)基于這樣的假設(shè)，即每一個(gè)細(xì)菌、菌團(tuán)或附著有細(xì)菌的顆粒物都只會形成一個(gè)單獨(dú)的肉眼可見的菌落。因此每一個(gè)這樣的菌團(tuán)或顆粒物被稱作一個(gè)菌落形成單位（CFU），檢測結(jié)果的單位寫為菌落形成單位每體積，在標(biāo)準(zhǔn)操作中，即為CFU/100mL。針對不同類型水樣或不同取樣體積，這個(gè)單位有可能會不同。

1．細(xì)菌數(shù)據(jù)操作過程

1.1培養(yǎng)支架從培養(yǎng)箱中取出，設(shè)置培養(yǎng)溫度；

1.2培養(yǎng)皿從支架上取下，放到干凈的操作桌板上；

1.3培養(yǎng)后在培養(yǎng)皿上觀察,計(jì)數(shù)所有的相應(yīng)菌落，如需要可使用放大鏡；

2.注意事項(xiàng)

2.1完成計(jì)數(shù)，否則菌落的顏色冷卻放置較長時(shí)間后會發(fā)生變化；

2.2多于1人進(jìn)行計(jì)數(shù)；

2.3自然光條件下進(jìn)行計(jì)數(shù)，但要避免陽光直射；

2.4于1mm的相應(yīng)菌落數(shù)量；

2.5過多，或難以分辨單個(gè)菌落，請將結(jié)果記錄為“數(shù)量過多無法計(jì)數(shù)（TNC）”。

六、微生物培養(yǎng)

不同種類微生物的培養(yǎng)需要使用不同的培養(yǎng)基。同時(shí)一種微生物也可以通過多種的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)。這樣主要介紹各種不同培養(yǎng)方法。

1.濾膜法

濾膜是一種微孔性薄膜。將水樣注入已滅菌的放有濾膜（孔徑0.45μm）的抽濾裝置中，經(jīng)過抽濾，細(xì)菌會被截留在膜上，然后將濾膜貼于相應(yīng)細(xì)菌的培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)過培養(yǎng)后，濾膜上會根據(jù)不同的培養(yǎng)基，出現(xiàn)各種不同的菌落。計(jì)算濾膜上生長的菌落數(shù)，可計(jì)算出每1L水中含有的各種細(xì)菌的菌群數(shù)。濾膜法具有高度的再現(xiàn)性，可用于檢驗(yàn)各種水樣，能比多管發(fā)酵法更快的獲得肯定的結(jié)果。

1.1濾裝置

抽濾裝置包括電池、真空泵、斗式過 濾杯、中間砂心過濾頭（燒結(jié)濾頭）、三角集液瓶以及不銹鋼制固定夾。以無菌操作。

1.2水樣過濾

用無菌鑷子（火焰滅菌器滅菌）夾取滅菌濾膜邊緣，貼在已滅菌的燒結(jié)濾頭（火焰滅菌器滅菌）上，夾好抽過濾杯。將適量的水樣注入過濾杯中，加蓋，開支真空泵，把水中的所有細(xì)菌抽濾在濾膜的表面。

1.3細(xì)菌培養(yǎng)

將濾膜移到培養(yǎng)皿里已被相應(yīng)培養(yǎng)基浸潤的吸收墊上，在移動培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

1.4結(jié)果觀察與報(bào)告

計(jì)算濾膜上生長的菌群菌落個(gè)數(shù)，根據(jù)過濾水樣的量，計(jì)算1L或100ml水樣中菌群數(shù)。

2.酶底物法

酶底物法為GB5750-2006收錄的用于大腸菌群及大腸埃希氏菌檢測標(biāo)準(zhǔn)方法，酶底物法是目前水中總大腸菌群及大腸埃希氏菌檢測的最先進(jìn)方法。以其方便快捷，假陽性低，適用大量樣品快速檢測等優(yōu)點(diǎn)正逐步被國內(nèi)檢測部門所認(rèn)可。相對于多管發(fā)酵和濾膜法，酶底物法檢測步驟大大減少，而且對實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求不高，檢測時(shí)間可減少到24小時(shí)，在日常水樣監(jiān)測及應(yīng)急監(jiān)測中具有很好的應(yīng)用前景，可及時(shí)檢測，預(yù)防，最大限度的減少重大公共安全事故的發(fā)生幾率。

2.1操作步驟：

用 100 mL的無菌稀釋瓶量取 100 mL 水樣，加入一管酶底物法培養(yǎng)基粉末，混搖均勻使之完全溶解。準(zhǔn)備 10 支10ml適當(dāng)大小的滅菌試管，用無菌吸管分別從上述稀釋瓶中吸取10mL水樣至各試管中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

2.2結(jié)果觀察與報(bào)告：

大腸菌群：將培養(yǎng) 24 h之后的試管取出觀察，如果試管內(nèi)水樣變成黃色則表示該試管含有總大腸菌群。計(jì)算有黃色反應(yīng)的試管數(shù)，對照下表1查出其代表的總大腸菌群最可能數(shù)CMPN）。 結(jié)果以MPN/100 mL 表示。 如所有管未產(chǎn)生黃色，則可報(bào)告為總大腸菌群未檢出。

表1   不同陽性結(jié)果的最可能數(shù)（MPN）及 95%可信范圍

大腸埃希氏菌：將培養(yǎng)24h顏色變成黃色的水樣的試管，在暗處用紫外燈觀察，如果有藍(lán)色熒光產(chǎn)生則表示有大腸埃希氏菌。計(jì)算有熒光反應(yīng)的試管數(shù)，對照表1 查出其代表的大腸埃希氏菌最可能數(shù)MPN）， 結(jié)果以MPN/100 mL 表示。 如所有管未產(chǎn)生藍(lán)色熒光，則可報(bào)告為大腸埃希氏菌未檢出。

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