描述：甘油三酯是由甘油和脂肪酸酯化而成，是血脂的主要成分，也是機(jī)體重要的供能物質(zhì)。高甘油三酯和高膽固醇血癥是臨床常見(jiàn)的高脂血癥，與許多疾病相關(guān)。本試劑盒應(yīng)用甘油磷酸氧化酶法與經(jīng)典的 GPO Trinder 酶學(xué)反應(yīng)原理可以對(duì)血液和食品飲料中的甘油三酯含量進(jìn)行測(cè)定，符合世界衛(wèi)生組織（WHO）、美國(guó) FDA、中國(guó)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》規(guī)定的甘油三酯臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度高，

檢測(cè)范圍為 20-2000μmol/L。

原理：（1）脂肪酶分解血清中的甘油三酯為甘油；（2）甘油激酶將甘油磷酸化為 3-磷酸甘油；（3）

3-磷酸甘油被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過(guò)氧化氫；在過(guò)氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。

適用范圍：測(cè)定血液、食品飲料中甘油三酯的含量。

組成 ：（250 次）

(1)    R1 試劑 40 ml

(2)    R2 試劑 10 ml

(3)    4 mmol/L 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml

4 oC，儲(chǔ)存 6 個(gè)月。

所需設(shè)備：酶標(biāo)儀、生化分析儀或 721、722 型可見(jiàn)光分光光度計(jì)。最佳工作波長(zhǎng) 550nm，如無(wú)此波長(zhǎng)建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530、490nm。

操作步驟：

一 樣本處理：

1.       飲品、清澈液體樣本：可直接進(jìn)行測(cè)定，如超過(guò)線(xiàn)性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

2.       血液：新鮮血液 4oC， 2000 g 離心 5 min 得到血漿，非抗凝血 4oC 放置 2 小時(shí)得到血清后才能用于甘油三酯的測(cè)定。如超過(guò)線(xiàn)性范圍用生理鹽水 1:1~1:5 稀釋后測(cè)定，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算濃度。

二 工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 試劑 R1 與 1 ml 試劑 R2 混合即可，立即使用或 4oC 保存 <1 天，變色棄去。

三 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?zhuān)?/span>用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩

沖液一致的液體，將 4 mM 甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋為 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、 7.8125 μmol/L，通常取其中 4~6 管即可，注意

設(shè)置 0 濃度對(duì)照反應(yīng)管。

四 甘油三酯濃度測(cè)定：

1.       參見(jiàn)下表進(jìn)行加樣。允許稍微增加或減少樣品的加入量，并同時(shí)調(diào)整工作液體積。

2.       37oC 或 25oC 反應(yīng) 15 分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在 60 分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

3.       先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測(cè)定各管OD值。

4.       繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并計(jì)算甘油濃度。

附 Excel 作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管 OD 值為 y 軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 x 軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊做圖向?qū)?，選擇-散點(diǎn)圖-，點(diǎn)擊-完成-。(2)

鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn)，點(diǎn)擊-添加趨勢(shì)線(xiàn)-，點(diǎn)擊-選項(xiàng)-，點(diǎn)擊-顯示公式-和-R² 值-。

加樣比例（檢測(cè)范圍 20-2000μmol/L）

（可對(duì)樣品和工作液比例進(jìn)行微量調(diào)整）

注：進(jìn)行微板測(cè)定時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品的體積可調(diào)整范圍 10-100μl，使用分光光度計(jì)測(cè)定時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品的體積也可隨之進(jìn)行調(diào)整。

說(shuō)明：

1. 在中國(guó)一般而言，正常人血清中甘油三酯含量范圍為0.56-1.7mmol/L（62-150mg/dl），血清中甘油濃度約為0.11mmol/L (10mg/dl).

2. 維生 素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、

強(qiáng)還原劑二硫蘇糖醇、巰基乙醇等會(huì)干擾測(cè)。肝素和EDTA在抗凝時(shí)的用量不會(huì)干擾測(cè)定。

3. 樣本即使保存在-20oC的環(huán)境下，甘油三酯也會(huì)自發(fā)水解。因此建議樣品4oC保存時(shí)間應(yīng)短于24小時(shí)，當(dāng)-70oC保存是，也應(yīng)不超過(guò)1個(gè)月。

4. 如果室溫較低，應(yīng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或在37oC進(jìn)行反應(yīng)。

5. 如果要測(cè)定組織細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量，請(qǐng)選擇使用E1013,組織細(xì)胞甘油三酯酶法測(cè)定試劑盒。

參考文獻(xiàn)：

1. Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.

2.  Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 –

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