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大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)ELISA試劑盒
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大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)ELISA試劑盒的原理:
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。ELISA試劑盒在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體。
ELISA試劑盒樣本收集以及處理方法:
液體類標本:
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
1)血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4)細胞培養(yǎng)上清:
A、檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分)。仔細收集上清。
B、檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并 放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5)組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)ELISA試劑盒標本的稀釋原則:
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi),檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。*計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。
標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
【生物素標記抗體的稀釋原則】
臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
【試劑盒特點】
A. 分子量大。合成肽采用化學方法制備,由于工藝的局限,合成數(shù)量有限,只能達到數(shù)百個氨基酸;而利用基因工程制備的抗原,分子量更大。
B. 穩(wěn)定性好。人白介素3(IL-3)ELISA試劑盒包被的抗原的穩(wěn)定性可使試劑盒的效期得到保證,早期以合成肽為包被抗原的試劑盒效期只3-4個月,采用基因工程抗原后效期大大延長了。
C. 基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達,表達產(chǎn)物包含更多的抗原決定簇,可提高試劑盒的靈敏度,提高檢出率。
D. 純化難度大。基因工程抗原的純化技術難度較大。
合成多肽抗原是根據(jù)蛋白質(zhì)抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。合成肽抗原有以下特點: a.分子量太小;b.一般只含有一個抗原決定簇;c.純度高;d.穩(wěn)定性差。
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(2)如實驗者未按照說明書進行實驗導致的問題,我司將不負有責任。
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大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)ELISA試劑盒新產(chǎn)品:
人細胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒 Human Cytochrome-C,Cyt-C ELISA試劑盒
人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒 Human lipoprotein lipase,LPL ELISA試劑盒
人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒 Human Glycogen phosphorylase II,GP-II ELISA試劑盒
人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒 Human Glycogen phosphorylase MM,GP-MM ELISA試劑盒
人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒 Human Glycogen phosphorylase BB,GP-BB ELISA試劑盒
人脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒 Human lipoprotein α,Lp-α ELISA試劑盒
人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒 Human Crosslaps,Cr ELISA試劑盒
人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒 Human cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen,CⅠCP ELISA試劑盒
人骨橋素(OPN)ELISA試劑盒 Human Osteopontin,OPN ELISA試劑盒
人P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA試劑盒 Human substance P receptor,SP-R ELISA試劑盒
人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒 Human Cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISA試劑盒
人內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒 Human Endothelial lipase,EL ELISA試劑盒
人橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )ELISA試劑盒 Human skeletal muscle Actinin-α,sm Actinin-α ELISA試劑盒
人骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒 Human Bone morphogenetic protein 7,BMP-7 ELISA試劑盒
人25羥基維生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA試劑盒 Human 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA試劑盒