副雞嗜血桿菌（HPG）檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：副雞嗜血桿菌（HPG）檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)樣本中的副雞嗜血桿菌（HPG），用于副雞嗜血桿菌（HPG）感染的輔助診斷。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)，設(shè)計(jì)一對(duì)副雞嗜血桿菌（HPG）特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)雞馬立克病毒(MDV)的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于對(duì)可疑感染者的病原學(xué)檢測(cè)。

說明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【核酸提取】

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取，請(qǐng)按照試劑說明書進(jìn)行操作。

1.    試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份），每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21μL/管。

2.    加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。

3.    PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

3.1  將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

3.2  設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇

ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

3.3  推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

4.    結(jié)果分析判定

4.1  結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)）、stop 值（一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)），以及 Threshold的 Value 值（上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照），重新分析結(jié)果。

4.2  結(jié)果判斷

陽性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線；

可疑：檢測(cè)通道 35值≤38，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為 35值≤38，且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線， 判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

5.    質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

6.    檢測(cè)方法的局限性

6.1 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

6.2 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

6.3 陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

6.4 病原體在流行過程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

6.5 不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

6.6 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；

6.7  本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

【注意事項(xiàng)】

1.    所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；

2.    試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；

3.    反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.    反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.    使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.    樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

7.    實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

8.    試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：上海烜雅生物科技有限公司

相關(guān)產(chǎn)品：

布氏桿菌(BS)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

山羊痘病毒(GTPV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

綿羊痘病毒(SPPV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

犬細(xì)小病毒(CPV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

炭疽桿菌(BA)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

貓瘟病毒(FPV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

類鼻疽伯克霍爾德菌(BP)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

鼻疽伯克霍爾德菌(BM)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

新孢子蟲(Ne)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

牛巴氏桿菌(PB)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

伊氏錐蟲(TE)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

兔黏液瘤病毒（RMV）檢測(cè)試劑盒（熒光-PCR法）

野兔熱(Tul)檢測(cè)試劑盒（熒光-PCR法）

馬皰疹病毒4型（EHV-IV）檢測(cè)試劑盒（熒光-PCR法）

羊衣原體(OC)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)