艱難梭菌（CD)試劑盒（熒光-PCR法）

規(guī)格：50T/盒

自備試劑：樣品 RNA

【檢驗原理】

本試劑盒對艱難梭菌（CD)基因保守區(qū)設(shè)計特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術(shù)對核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，從而達(dá)到快速檢測之目的。

試劑組成】

名 稱	規(guī) 格
酶液	50μL×1 管
CD反應(yīng)液	500μL×2 管
CD陽性質(zhì)控品	50μl ×1 管
陰性質(zhì)控品	250μl×1 管

【儲存條件及有效期】

-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融，有效期12個月。

【適用儀器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。

艱難梭菌（CD)試劑盒（熒光-PCR法）結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。

判斷

陽性：檢測通道Ct值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線：

可疑：檢測通道35

   且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

  陰性：樣本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值。

  6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

   陰性質(zhì)控品：Ct值＞38或無Ct值顯示；

   陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且Ct值≤32

  以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。

艱難梭菌（CD)試劑盒（熒光-PCR法）它具有下列特點：

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。

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