普利萊 Fluo-8,AM,新型鈣離子熒光探針檢測試劑盒 貨號: C0012

描述：鈣離子濃度變化是活細(xì)胞接受外界刺激后產(chǎn)生級聯(lián)反應(yīng)的重要信息傳遞方式，因此細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）介導(dǎo)的相關(guān)藥物篩選、以及其他相關(guān)實(shí)驗(yàn)中非常重要的一種研究手段，該領(lǐng)域中常使用鈣離子熒光探針與鈣離子的特異性結(jié)合來觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度水平的變化。Fluo-8, AM是目前靈敏度最高的可見光激發(fā)波長Ca²⁺綠色熒光探針。Fluo-8, AM是Fluo-8的一種乙酰甲酯衍生物，具有細(xì)胞 膜滲透性，只需與細(xì)胞簡單孵育培養(yǎng)，即可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，生成不具膜滲透性的Fluo-8，與細(xì)胞內(nèi)游離Ca²⁺結(jié)合，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，一般情況，細(xì)胞受到藥物處理后，Ca^{2 +}濃度通常增加5至10倍， 所顯示光譜可被熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀、熒光分光鏡、熒光酶標(biāo)儀等多種儀器檢測。

Fluo-8,AM, 新型鈣離子熒光檢測探針優(yōu)勢如下：

1、    Fluo-8的吸收峰和發(fā)射峰分別為490 nm和514 nm?？梢杂?88nm的氬離子激光很好地激發(fā)，其熒光強(qiáng)度隨Ca²⁺濃度而增加。

2、   對Ca²⁺變化水平檢測敏感度更高，F(xiàn)luo-8與細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺結(jié)合后，熒光增強(qiáng)大于200倍，比常用的Fluo-3強(qiáng)四倍、比Fluo-4強(qiáng)兩倍。

3、   Fluo-8,AM具有較弱的溫度依賴性，在室溫或37℃與細(xì)胞孵育均可；而Fluo-3，F(xiàn)luo-4嚴(yán)格要求在37℃孵育。

4、   應(yīng)用廣泛，與許多細(xì)胞系和靶向樣本兼容，不會受配體或靶標(biāo)本身信號干擾。

組成：Fluo-8,AM母液（250X） 45ul    -20℃ 避光保存 

      Pluronic F127 母液      45ul      4℃ 保存

      稀釋緩沖液            80ml      4℃ 保存

儲存： 按要求保存，一年有效。

操作步驟：

1. Fluo-8,AM工作液配制： 取Fluo-8,AM母液（250X）6ul與等量Pluronic F127母液混勻，加入1488ul稀釋液緩沖液，混勻后，即為Fluo-8,AM工作液。

2. 將細(xì)胞以4×10⁴個細(xì)胞/100μl/孔接種于96孔黑色壁、透明底培養(yǎng)板中，培養(yǎng)過夜。

3. 吸棄培養(yǎng)液，加入100ul Fluo-8,AM工作液，以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)，37℃或室溫孵育0.5～1小時。 

4. 用稀釋緩沖液洗滌細(xì)胞兩次，然后加0.5ml 稀釋緩沖液，使用FITC通道上機(jī)測量。

說明

1. 請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2. Fluo-8,AM母液和Pluronic F-127母液使用前，請短暫離心。保證液體落入管底。

3. Fluo-8,AM母液若單次不能用完，建議分裝保存。

4. Pluronic F-127母液如果有結(jié)晶析出，可重新加熱至40-50℃溶解，不影響使用。

5. 加Fluo-8,AM工作液之前，需盡量去除培養(yǎng)基殘留。

6. 如果使用培養(yǎng)基稀釋Fluo-8,AM探針，應(yīng)使用無血清、無酚紅的培養(yǎng)基。

7. 建議您在正式實(shí)驗(yàn)前先摸索一下細(xì)胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養(yǎng)時間等，

以確定最佳實(shí)驗(yàn)條件。

8.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

普利萊APPLYGEN常用抗體列表：

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