普利萊 組織細(xì)胞總谷胱甘肽(GSH)檢測(cè)試劑盒 貨號(hào): E2015
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普利萊 組織細(xì)胞總谷胱甘肽(GSH)檢測(cè)試劑盒 貨號(hào): E2015

普利萊-組織細(xì)胞總谷胱甘肽(GSH)檢測(cè)試劑盒-貨號(hào)-E2015

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品牌 普利萊
產(chǎn)品品牌 APPLYGEN
產(chǎn)品名稱 普利萊 組織細(xì)胞總谷胱甘肽(GSH)檢測(cè)試劑盒
英文名稱 無(wú)
貨號(hào) E2015
產(chǎn)品規(guī)格 100次
用途 科研實(shí)驗(yàn)專用
儲(chǔ)存 具體根據(jù)說(shuō)明書操作
儲(chǔ)存周期 根據(jù)說(shuō)明書具體操作
供貨能力 現(xiàn)貨
商品介紹
普利萊 組織細(xì)胞總谷胱甘肽(GSH)檢測(cè)試劑盒 貨號(hào): E2015

貨號(hào)    產(chǎn)品名稱規(guī)格價(jià)格(元)
E2015

組織細(xì)胞總谷胱甘肽檢測(cè)試劑盒

100T560

描述:組織細(xì)胞總谷胱苷肽檢測(cè)試劑盒(Total Glutathione Assay Kit)是一種靈敏簡(jiǎn)單的檢測(cè)總谷胱甘肽的試劑盒。總谷胱甘肽包括還原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)。GSH 是細(xì)胞中巰基的主要來(lái)源,對(duì)于維護(hù)蛋白巰基適當(dāng)?shù)难趸€原狀態(tài)有重要作用,動(dòng)物細(xì)胞中GSH占總谷胱甘肽比例約90-95%。

原理:GSH可以和DTNB反應(yīng)生成黃色的TNB和GSSG,利用該反應(yīng)可以通過(guò)測(cè)定生成TNB的吸光度(A412nm)定量檢測(cè)GSH;另外谷胱甘肽還原酶可以將GSSG還原為GSH,在反應(yīng)體系中增加谷胱甘肽還原酶反應(yīng),可以測(cè)定總谷胱甘肽,并能通過(guò)酶反應(yīng)將GSSG反復(fù)還原為GSH,從而極大提高GSH和DTNB顯色反應(yīng)對(duì)GSH檢測(cè)的靈敏度。本試劑盒以GSH為標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)線性范圍為1.25-40μM,靈敏度≤1.25μM。

適用:本試劑盒能夠檢測(cè)動(dòng)物組織、培養(yǎng)細(xì)胞和多種其它生物樣本中的總谷胱甘肽含量。

組成:

組份名稱

規(guī)格

數(shù)量

總谷胱甘肽檢測(cè)緩沖液

50ml/瓶

1

還原型谷胱甘肽(GSH)

6mg/管

1

DTNB

4mg/管

1

谷胱甘肽還原酶

150μl/管

1

NADPH

5mg/管

1

蛋白去除試劑S

0.5 g/管

1

組織細(xì)胞裂解液

100ml/瓶

1

DMSO

1.2ml/管

1

 

儲(chǔ)存條件:-20℃儲(chǔ)存,12個(gè)月有效。NADPH配制成溶液后,可適當(dāng)分裝,-70℃儲(chǔ)存。GSH和DTNB溶解后,-20℃儲(chǔ)存。蛋白去除試劑S配制成溶液后4℃儲(chǔ)存。

所需設(shè)備:酶標(biāo)儀,最佳工作波長(zhǎng)412nm

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備

1.1 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集新鮮細(xì)胞,PBS洗滌細(xì)胞一次,離心收集細(xì)胞,吸盡上清。加入

200 μl的預(yù)冷的組織細(xì)胞裂解液,冰浴勻漿或超聲裂解細(xì)胞。4℃,10000g離心10分鐘。取上清和蛋白沉淀試劑S溶液1:1混合并渦旋。4℃,10000g離心10分鐘。取上清用于總谷胱甘肽的測(cè)定。不立即測(cè)定的樣品可以-70℃保存。如果樣品中總谷胱甘肽超出測(cè)定范圍,可利用蛋白沉淀試劑S溶液適當(dāng)稀釋后測(cè)定,稀釋倍數(shù)可達(dá)10-20倍。

1.2 組織樣品的準(zhǔn)備:利用含1mMEDTA的PBS灌流或漂洗組織,去除組織中的血液,然

后取約20mg組織,加入400μl的預(yù)冷的組織細(xì)胞裂解液,冰浴勻漿。4℃,10000g離心10分鐘。取上清和蛋白沉淀試劑S溶液1:1混合并渦旋。4℃,10000g離心10分鐘。取上清用于總谷胱甘肽的測(cè)定。不立即測(cè)定的樣品可以-70℃保存。如果樣品中總谷胱甘肽超出測(cè)定范圍,可利用蛋白沉淀試劑S溶液適當(dāng)稀釋后測(cè)定,稀釋倍數(shù)可達(dá)10-20倍。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備

2.1 GSH儲(chǔ)備液的配制:在本試劑盒提供的6mg GSH中加入1ml的純水,溶解并混勻,即為GSH儲(chǔ)備液,濃度為20mM。

 2.2 DTNB儲(chǔ)備液的配制:在本試劑盒提供的4mg DTNB中加入1ml本試劑盒提供的DMSO溶解并混勻,即為DTNB儲(chǔ)備液,濃度為10mM。

 2.3 NADPH儲(chǔ)備液的配制:在本試劑盒提供的5mg NADPH中加入1ml純水,溶解并混勻,即為NADPH儲(chǔ)備液,濃度為5mg/ml。

 2.4 總谷胱甘肽檢測(cè)工作液的配制:根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)參考下表配制適當(dāng)量的總谷胱甘肽檢測(cè)工作液,表中試劑按比例混合后即為總谷胱甘肽檢測(cè)工作液。

1個(gè)樣品

10個(gè)樣品

50個(gè)樣品

總谷胱甘肽檢測(cè)緩沖液

150μl

1.5ml

7.5ml

DTNB儲(chǔ)備液

5μl

50μl

250μl

谷胱甘肽還原酶

1μl

10μl

50μl

 

2.5 NADPH工作液的配制:取NADPH儲(chǔ)備液,利用總谷胱甘肽檢測(cè)緩沖液稀釋10倍,配制為0.5mg/ml的NADPH工作液。每檢測(cè)一個(gè)樣品需要50μl的0.5mg/ml NADPH。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備

將20mM的GSH儲(chǔ)備液用蛋白去除試劑S溶液稀釋成20、10、5、2.5、1.25、0.62μM濃度的GSH溶液,用于標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定。由于GSH在蛋白去除S溶液中不夠穩(wěn)定,每次測(cè)定需新鮮配制系列標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。

4、測(cè)定方法

4.1 參考下表,使用96孔板,依次加入總谷胱甘肽檢測(cè)工作液、樣品或標(biāo)準(zhǔn)品后,混勻,25℃或室溫孵育2分鐘。

空白對(duì)照

標(biāo)準(zhǔn)曲線

樣品

總谷胱甘肽檢測(cè)工作液

150 μl

150 μl

150 μl

標(biāo)準(zhǔn)品

10 μl

樣品

10 μl

蛋白沉淀試劑S溶液

10 μl

25℃或室溫孵育

2 min

2 min

2 min

NADPH工作液

50 μl

50 μl

50 μl

25℃孵育

20 min

20 min

20    in

 

4.2  參考上表,各孔加入NADPH工作液50μl,25℃孵育20分鐘。

4.3 各孔加入NADPH工作液50μl啟動(dòng)谷胱甘肽還原酶反應(yīng)后,立即開始計(jì)時(shí),并在5、10、20分鐘等時(shí)間點(diǎn)測(cè)定A412nm。如果樣品吸光度較低,可適當(dāng)降低標(biāo)準(zhǔn)品濃度,延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行樣品測(cè)定。

5. 數(shù)據(jù)處理

利用GSH標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,并獲得橫縱坐標(biāo)之間的函數(shù)關(guān)系式,然后利用標(biāo)準(zhǔn)曲線和各樣品的吸光度值計(jì)算樣品的總谷胱甘肽濃度。由于有多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)曲,可以選擇標(biāo)曲線性最好的時(shí)間點(diǎn)計(jì)算樣品總谷胱甘肽濃度。GSH標(biāo)曲測(cè)定如下圖所示:

參考文獻(xiàn)

1.Akerboom, T.P., and Sies, H., 1981. Assay of glutathione, glutathione disulfide, and glutathione mixed disulfides in biological samples. Methods Enzymol., 77, 373-382.

     2. Nair, S. et al., 1991. Flow cytometric monitoring of glutathione content and anthracycline retention in tumor cells. Cytometry, 12, 336-342.

注意事項(xiàng)

1. 本試劑盒檢測(cè)涉及氧化還原反應(yīng),很多氧化劑和還原劑都會(huì)干擾試劑盒的測(cè)定,特別是巰基乙醇、DTT等含有巰基的試劑會(huì)嚴(yán)重干擾本試劑盒的測(cè)定,請(qǐng)盡量避免。

2. 嚴(yán)格控制反應(yīng)的溫度和反應(yīng)時(shí)間,并在每次測(cè)定同時(shí)利用標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品中谷胱甘肽濃度過(guò)低時(shí),可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間。

3. NADPH在溶液中容易分解,要嚴(yán)格按儲(chǔ)存條件保存。

4. 初次使用試劑盒時(shí),粉末試劑和小體積液體試劑請(qǐng)適當(dāng)離心后使用。

5. 本產(chǎn)品僅限專業(yè)人員用于科學(xué)研究,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。

     6. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。






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公司名稱 北京普利萊基因技術(shù)有限公司
聯(lián)系賣家 劉總 (QQ:584291973)
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