描述:線粒體膜電位熒光探針羅丹明123（Rh123）是一種可對活細胞線粒體染色的熒光染料，分子式: C21H17ClN2O3，分子量: 380.8243，為紅色至棕色粉末。Rh123可以快速通過細胞 膜，僅需幾分鐘就可以被具有活性的線粒體俘獲，選擇性地聚集在線粒體內(nèi)，呈黃綠色熒光。對細胞沒有任何毒性。Rh123廣泛用作檢測線粒體膜電位，也常用于細胞凋亡檢測。

規(guī)格：（100次，50次減半）

羅丹明123熒光探針濃縮液（1mM） 100ul

儲存: -20℃避光保存，一年有效

波長：最大激發(fā)波長為507nm，最大發(fā)射波長為529nm。可以使用激發(fā)波長511nm,發(fā)射波長535nm或激發(fā)波長488～505nm，發(fā)射波長530nm

操作步驟:

羅丹明123熒光探針工作液配制：

用無酚紅、不含血清的新鮮培養(yǎng)基稀釋羅丹明123熒光探針濃縮液（1mM）至1~20uM，最佳工作濃度建議預實驗確定。

一般情況下，96孔板單孔細胞樣本50ul工作液足夠檢測，6孔板單孔0.5ml工作液足夠檢測。

懸浮細胞：

1.    離心收集細胞，棄上清，用PBS洗滌兩次。

2.    按比例將Rh123工作液加入細胞，37℃孵育30分鐘至1小時。

3.    離心，去除Rh123緩沖液，用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞。

4.    加入4%組織細胞固定液（貨號B1057）固定15~20分鐘，用PBS洗滌。

5.    用熒光顯微鏡觀察。

貼壁細胞：

1.         用載玻片準備細胞爬片，細胞數(shù)目應為5×104～5×105個/mL或消化收集細胞后，

2.         孵育該載玻片，細胞貼壁后用PBS或Hank's液洗滌細胞。

3.         將Rh123工作液加至附有細胞的載玻片上，37℃孵育30分鐘至1小時。

4.         去除Rh123緩沖液，并用培養(yǎng)基洗滌細胞。

5.         加入10%福爾馬林緩沖液固定15~20分鐘，用PBS洗滌。

6.         熒光顯微鏡觀察細胞。

也可以消化收集細胞后參照懸浮細胞處理方式進行膜電位檢測。

結(jié)果：正常細胞線粒體呈黃綠色熒光；凋亡細胞熒光強度減弱或消失。

說明

1. 操作時需戴手套。

2. 羅丹明123為通透性染料，可以自由進入細胞。

3. 孵育時，必須避免光照。

4. 染色完成后，即可進行熒光檢測分析。