描述：甘油三酯(TG)是由甘油和脂肪酸酯化而成，是血脂的主要成分，也是機體重要的供能物質。

本試劑盒避免了有毒的氯仿甲醇提取、繁雜的氮氣吹干和脂質復溶等步驟，采用高效能試劑進行組織細胞裂解和甘油三酯抽提，以及優(yōu)化的GPO Trinder酶學反應組分和操作步驟。簡單易行、靈敏度高，線性范圍為 20-2000μmol/L。適用于生物、醫(yī)學、農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)、食品材料，用于精確測量固態(tài)食品材料、含高濃度油料樣品中的甘油三酯。

適于測定樣品

(1)  油料植物組織和種子、固態(tài)食品材料

(2)  血漿甘油三酯測定請使用 E1003-1

(3)  液態(tài)成品油或含高濃度油樣品

測定原理：根據(jù)經(jīng)典 GPO Trinder 反應，脂肪酶分解血甘油三酯為甘油。甘油激酶催化甘油生成 3-磷酸甘油，后者被磷酸甘油氧化酶氧化生成過氧化氫，在過氧化物酶催化下生色底物轉化為苯醌亞胺，光密度值與甘油三酯濃度成正比。

組成  (105 次微板測定或 30 次 1 ml 比色杯測定)

(1)  裂解液  50 ml

(2)  R1 試劑  16 ml

(3)  R2 試劑  4 ml

(4)  4 mM 甘油標準品 1 ml

4 oC 避光儲存 6 月。

所需設備

721、722 型可見光分光光度計、酶標儀、生化分析儀。96

孔微板或比色杯光徑 1cm。最佳工作波長 550nm，如無此波

長建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530、490nm。

操作步驟：

一 樣本裂解：

用減量稱重法對樣品進行精確稱重，建議按比例每1mg組織加20μl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質含量變異而產(chǎn)生的誤差。加入裂解液后可用研缽對樣品進行研磨，而后將研磨液轉移到新的離心管中，室溫靜置10分鐘。

二. 裂解液處理：

1. 取適量上清液轉移到1.5ml離心管中，進行步驟2的操作。余下的裂解液可用BCA法蛋白定量試劑盒(#P1511)進行蛋白定量或－20oC儲存。

2.        70oC 加熱10分鐘，組織量多時可能出現(xiàn)絮狀沉淀。

3.        室溫2000rpm離心5分鐘，上層清液即可用于酶學測定。

二 工作溶液配制：按4:1比例，取4 ml試劑R1與1 ml試劑R2混合即可，立即使用或4oC保存<1天，變色棄去。

三 標準品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將4 mM甘油標準品倍比稀釋為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 μmol/L，通常取其中4~6管即可，注意設置0濃度對照反應管。

四 甘油三酯濃度測定：

1.        參見下表進行加樣。以96孔板為例，待測樣品體積可在5、10、20μl之間，推薦以10μl為起始加樣量。如果樣品測量值超出線性范圍，可進行適當稀釋，最后根據(jù)稀釋倍數(shù)計算濃度。

2.        37oC或25oC反應 15分鐘。反應平衡后顏色在60分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

3.        先用蒸餾水+工作液的空白管調零，然后測定各管OD值。

4.        繪制標準曲線并計算甘油三酯濃度。

附Excel作圖步驟：各標準管OD值為y軸，標準品濃度為x軸。(1)鼠標左鍵圈住數(shù)據(jù)，點擊做圖向導，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R²值-。

5.        以每mg蛋白濃度或細胞數(shù)校正甘油三酯含量。

       加樣比例（檢測范圍20-2000μmol/L）

      （可對樣品和工作液比例進行微量調整）

說明：

1.  維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、強還原劑二硫蘇糖醇、巰基乙醇等會干擾測。高濃度EDTA會干擾測定。

2.  樣本即使保存在-20oC的環(huán)境下，甘油三酯也會自發(fā)水解。因此建議樣品4oC保存時間應短于24小時，當-70oC保存時，也應不超過1個月。

3.  如果室溫較低，應延長反應時間或在37oC進行反應。

4.  不同類型組織和細胞內(nèi)甘油三酯含量差別很大，應根據(jù)預實驗調整初始的裂解液的加入量。對于脂肪組織而言，一般來說裂解液用量在20-30mg/ml即可。

參考文獻：

1.  Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.

2.  Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145