磷酸果糖激酶(PFK)測試盒
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磷酸果糖激酶(PFK)測試盒測定意義
測定意義
PFK(EC 2.7.1.11)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,負責將果糖-6-磷酸和ATP轉化為果糖-1,6二磷酸和ADP,是糖酵解過程的關鍵調(diào)節(jié)酶之一。
測定原理
PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映PFK活性。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
提取液:液體×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入2.6mL試劑一,充分震蕩溶解。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入2.6mL試劑一,充分震蕩溶解。
操作步驟:
一、粗酶液提?。?span lang="EN-US">
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清液待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3.血清等液體:直接測定。
二、測定操作:
1.分光光度計預熱30 min,調(diào)節(jié)波長到412 nm,蒸餾水調(diào)零。
2.試劑二置于37℃水浴中預熱30min。
3.空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL蒸餾水、800 μL試劑一、50μL試劑二和50 μL試劑三,迅速混勻,于412nm處測定3min內(nèi)吸光值變化,第10s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2。△A空白管=A2-A1
4.測定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL上清液、800 μL試劑一、50μL試劑二和50 μL試劑三,,迅速混勻,于412nm處測定3min內(nèi)吸光值變化,第10s吸光值記為A3,第190s吸光值記為A4。△A測定管=A4-A3
磷酸果糖激酶(PFK)測試盒產(chǎn)品優(yōu)點如下:
1、快速簡便:雙試劑,96孔板直接操作,快速、簡便。
2、取樣量微:需要的樣本量是羥胺法的1/10。
3、靈敏度高:檢測線0.5U/ml,是羥胺法5倍,鄰苯三酚法的200倍
4、穩(wěn)定性好:批內(nèi)CV=5.50%,批間CV=3.32%,試劑盒2~8℃存放3個月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.2%。
6、回收試驗: X =102.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復性強。且特異性強,不受類SOD物質(zhì)的干擾
8、測試面廣:可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細胞、細菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
磷酸果糖激酶(PFK)測試盒產(chǎn)品售后有保障、品質(zhì)無憂 高保障 品質(zhì)現(xiàn)貨
1.嚴格的質(zhì)量控制:嚴格檢測每一批產(chǎn)品,確保產(chǎn)品穩(wěn)定性,靈敏度。
2.專業(yè)的產(chǎn)品包裝:適應產(chǎn)品特性的包裝,確保運輸?shù)陌踩院痛鎯Φ挠行?span lang="EN-US">
3.秉持“客戶購買我們的產(chǎn)品就是收獲一份價值,一份安心的信念,竭誠提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品,售后服務無優(yōu)