1、應(yīng)用范圍

DENV Detect IgM-ELISA檢測(cè)試劑是一種用來定性檢測(cè)人是否感染登 革熱病毒的ELISA檢測(cè)系統(tǒng)，它可以檢測(cè)出人血清中是否存在抗登 革熱病毒源性重組抗原（DENVRA I-IV）的IgM抗體。此診斷實(shí)驗(yàn)可輔助診斷人是否感染了登 革熱病毒。此試劑盒不能用于篩查血液或血液成分，僅供體外診斷用。

2、前言說明

登 革熱是一種急性 病 毒性疾病，它主要通過埃及伊蚊傳播。登 革熱在臨 床上主要表現(xiàn)為：雙相熱、皮疹和造血抑制，還可表現(xiàn)出全身癥 狀，如渾身不舒服、關(guān)節(jié) 痛、肌 肉疼 痛和頭 痛，有時(shí)還可能出現(xiàn)極為罕見的出血性高燒，并可能導(dǎo)致致命性的休克。登 革熱主要流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)，大概每年會(huì)發(fā)生100,000,000例。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年大概會(huì)出現(xiàn)500到1000萬例登 革熱病 人，同時(shí)還會(huì)出現(xiàn)250000到500000例登 革熱出血 熱。在2002年，據(jù)報(bào)道，30多個(gè)拉丁美洲的國家出現(xiàn)10000000例登 革熱病 人，并且大多數(shù)是登 革熱出血 熱（DHF）病 人。之后在2003年到2005年，在印度的一些地方也廣泛流行DHF。在美國，據(jù)報(bào)道，DHF病 人在1996到2002年就增加了三倍。據(jù)報(bào)道說，登 革熱也在夏威夷和德克薩斯州的拉雷多爆發(fā)過。由于病毒的潛在傳 染性，一些病毒包括登 革熱都被列為CDD的A類潛在傳染原。Inbios公司的登 革熱IgM抗體捕獲法ELISA試劑盒適很適合于CDC中使用，在感染后3到5內(nèi)內(nèi)，原發(fā)性和續(xù)發(fā)性 病 人的體內(nèi)都有可檢測(cè)到的IgM抗體水平，而且這種抗體通常可以在人體內(nèi)持續(xù)90天。

3、實(shí)驗(yàn)原理

DENV Detect IgM ELISA試劑盒是由一種酶聯(lián)擴(kuò)大的兩步法免疫檢測(cè)系統(tǒng)。在此實(shí)驗(yàn)中，將登 革熱檢測(cè)陰性質(zhì)控（代表不反應(yīng)的血清）、陽性質(zhì)控和未知抗體濃度的血清樣品加入到包被了抗人IgM抗體的微孔中溫育，之后分別加入登 革熱源性重組抗原DENVRA（I-IV）和正常細(xì)胞抗原（NCA）進(jìn)行溫育。登 革熱IgM試劑盒的血清樣品必須用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋。溫育并洗板后，用HRP標(biāo)記的DENVRA（I-IV）特異性抗體處理。第 二次溫育并洗板后，加入TMB底物液進(jìn)行溫育。之后再加入酸性終止液，450nm處測(cè)OD值可確定底物反應(yīng)的程度。當(dāng)高于一定數(shù)值時(shí)（臨界值），樣品的吸光度值可確定樣品中是否存在登 革熱抗體。

注意：陰性質(zhì)控和弱陽性質(zhì)控以內(nèi)在質(zhì)控形式提供，其目的是為了監(jiān)測(cè)試劑盒成分的完整性。

4、試劑盒成分

登 革熱IgM ELISA試劑盒提供了足夠做96人份所需要的試劑。試劑盒成分如下：

登 革熱檢測(cè)特定材料：

1） 抗人IgM包被的包被板：帶板蓋的板架，抗人IgM包被的96孔包被板。2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定?？谷薎gM包被的微孔可捕獲人樣品中的IgM抗體。

2） 樣品稀釋液：1瓶，25ml，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，0.05%的Proclin-300防腐劑。用于試驗(yàn)樣本，陰性質(zhì)控和陽性指控的稀釋，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

3） 即用型的登 革熱重組抗原：1瓶，3ml，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，0.05%的Proclin-300防腐劑，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

4） 即用型正常細(xì)胞抗原（NCA）：1支，3ml，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，0.05%的Proclin-300防腐劑，COS-1細(xì)胞上清。，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

5） 登 革熱檢測(cè)陰性質(zhì)控：1支，50ul的陰性血清，登 革熱檢測(cè)陰性質(zhì)控可輔助監(jiān)測(cè)試劑盒的完整性。2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定

6） 登 革熱檢測(cè)陽性質(zhì)控：1支，50ul的陽性血清，登 革熱檢測(cè)弱陽性質(zhì)控可輔助監(jiān)測(cè)試劑盒的完整性。2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定

7） 10倍濃縮洗滌液：1瓶，120ml，含吐溫20的磷酸緩沖鹽，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

8） HRP標(biāo)記的即用型酶聯(lián)物，1瓶，6ml，HRP標(biāo)記的黃熱病毒活性單克隆抗體，含吐溫20的Tris-citrate緩沖液，＜0.01%的硫柳汞防腐劑和添加劑，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

9） Enwash：1瓶，20mlEnwash溶液，含吐溫20的磷酸緩沖鹽，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

10） TMB底物液：1瓶，9ml，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：底物液必須始終儲(chǔ)存于避光試劑瓶中。

11） 終止液：1瓶，內(nèi)含6ml即用型的終止液，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

注意：強(qiáng)酸，請(qǐng)戴保護(hù)手套、口罩和安全鏡，按照安全條理處理所有的材料。

5、實(shí)驗(yàn)所需器材但試劑盒不提供

1） 可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

2） 生物學(xué)或高純度水

3） 真空泵

4） 洗板機(jī)

5） 1-10ul的單道移液器，50-200ul的單道和多道移液器。

6） 聚丙烯試管

7） Parafilm封口膜

8） 計(jì)時(shí)器

9） 旋渦混合器

深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司創(chuàng)立于1995年初，位于深圳市坪山區(qū)中城生命科學(xué)園內(nèi)。公司成立二十多年來，專注于生物科技的免疫學(xué)領(lǐng)域，擁有從事生物技術(shù)研究的專業(yè)隊(duì)伍、符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室、是- -家集研發(fā)、銷售、服務(wù)于- -體的高新技術(shù)企業(yè)?？茲欉_(dá)生物作為德國DRG、德國IBL、 美國CORTEZ、日本IBL等多家國際 診斷產(chǎn)品公司的中國代理商，希望能更好的滿足您的需要，我們能夠?yàn)槟峁┒嗥贩N、多方法、 多系列的診斷產(chǎn)品，保證穩(wěn)定快速供貨?？茲欉_(dá)生物始終視質(zhì)量和信譽(yù)為生命，在提供 產(chǎn)品的同時(shí)，亦一直提供完善熱忱的技術(shù)服務(wù)，歷年來得到了全國各地用戶的高度贊許，希望在未來繼續(xù)得到您的支持。

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