?普利萊廠家批發(fā) BCA法蛋白定量試劑盒  蛋白定量試劑盒 大量現(xiàn)貨起批

描述：Bicinchoninic acid (BCA )法是近來廣為應(yīng)用的蛋白定量方法。其原理與Lowery法蛋白定量相似，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu1+。BCA與Cu1+結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nm處有高的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，據(jù)此可測定蛋白質(zhì)濃度。與Lowery法相比，BCA蛋白測定方法靈敏度高，操作簡單，試劑及其形成的紫藍(lán)色復(fù)合物穩(wěn)定性俱佳，并且受干擾物質(zhì)影響小。與Bradford法相比，BCA法的顯著優(yōu)點(diǎn)是不受去垢劑的影響。

組成與儲存：(1) BCA Reagent 100 ml，室溫保存；(2) Cu Reagent 2 .5ml，室溫保存；(3) BSA standard 4 mg/ml 1 ml，?20oC凍存。12個月有效?？蛇M(jìn)行500次微板(microplate)測定或100次1 ml比色杯測定。

所需設(shè)備：比色計、酶標(biāo)儀或微板比色儀，最佳工作波長562 nm，可在540-590 nm之間。

工作溶液(Working Reagent, WR)配制：將50體積BCA Reagent與1體積Cu Reagent混合即為WR工作試劑，呈嫩綠色；室溫1周內(nèi)穩(wěn)定。

標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液配制：用雙蒸水、0.9%生理鹽水、PBS或與待測蛋白樣品匹配的緩沖液進(jìn)行倍比稀釋:20 μl 4000 μg/ml BSA + 30 μl稀釋溶液(H2O/PBS/0.9%NaCl) = 50 μl (BSA=1600 μg/ml)，從中取25 μl連續(xù)倍比稀釋，得到BSA標(biāo)準(zhǔn)溶液1600、800、400、200、100、50、25 μg/ml，各25 μl。通常，樣品蛋白濃度不會太高，也可以預(yù)先稀釋待測樣品，可以省略1600 μg/ml標(biāo)準(zhǔn)管而直接從800或1000 μg/ml開始，能節(jié)省標(biāo)準(zhǔn)蛋白用量。

蛋白濃度測定：

蛋白質(zhì)濃度線性檢測范圍為10-2000 μg/ml。標(biāo)準(zhǔn)測定時，用1 cm光程玻璃或塑料比色皿，反應(yīng)終體積1.1 ml，比色計測定。微板測定時，用96孔板，反應(yīng)終體積225 μl，用酶標(biāo)儀、微板比色儀測定。

1.     標(biāo)準(zhǔn)測定：將0.05~0.1 ml標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本與1 ml WR工作溶液混合。

微板測定：將25 μl標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本與200 μl WR工作溶液混合。

2.     37oC反應(yīng)30min；也可25oC室溫2小時或過夜。60oC30 min反應(yīng)可增加檢測靈敏度至5-250μg/ml。

3.     將反應(yīng)管冷卻至室溫。測定562 nm (可在540-590 nm之間)光密度(OD)值。

4.     繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。X軸為BSA標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度(mg/ml或μg/ml)，Y軸為各標(biāo)準(zhǔn)管對應(yīng)的OD562值。用Excel擬合曲線并計算蛋白濃度。

表1 標(biāo)準(zhǔn)測定和微板測定方案的加樣量和比例

注意事項(xiàng)

1.     37oC30min或25oC室溫反應(yīng)2小時對測量較為便利，但嚴(yán)格來講此時反應(yīng)尚未達(dá)到終點(diǎn)，通常每10 min OD562值升高約2.3%。然而，通常在10min內(nèi)可以測定30管并不會明顯影響測定精度。

2.     BCA法檢測范圍為20-2000 μg/ml。檢測0.5~10 μg/ml高度稀釋蛋白樣品應(yīng)采用Bradford法蛋白質(zhì)定量試劑盒(# P1510)。60oC30 min反應(yīng)可增加檢測靈敏度至5~250μg/ml。

3.     BCA法檢測樣品中含有脂類物質(zhì)時光吸收值會偏高。樣品中EDTA或葡萄糖濃度大于10 mM不能使用BCA方法，葡萄糖濃度大于10 mM時可用改良Lowry法蛋白定量試劑盒#P1512，EDTA大于10 mM的樣品可用Bradford法蛋白質(zhì)定量試劑盒(# P1510)。另外，蛋白質(zhì)樣品經(jīng)液體樣品蛋白抽提試劑(#P1255)沉淀后，可徹底去除干擾BCA法、Bradford法、和Lowry法蛋白測定的物質(zhì)。

4.     欲使測量能耐受下面表2所提示的最大干擾物質(zhì)濃度，并保持測量精度，應(yīng)在蛋白標(biāo)準(zhǔn)管中加入相應(yīng)濃度的干擾物質(zhì)，但會給操作帶來不便。

5.     可測量吸附于固相支持物乳酶標(biāo)板、瓊脂糖、親和層系凝膠上的蛋白。

6.     每次測定應(yīng)該重新測定并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

目前，使用普利萊BCA蛋白定量試劑盒發(fā)表的SCI文章已超過百篇，部分文章如下，供參考。

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