兒茶酚胺（三聯(lián)檢）

產(chǎn)品名稱

通用名稱：腎上腺素/去甲腎上腺素/多巴胺聯(lián)合檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：CAT ELISA

產(chǎn)品規(guī)格：3×96T

產(chǎn)品別名：兒茶酚胺是一類芳香胺的總稱（去甲腎上腺素、腎上腺素、多巴胺以及他們的衍生物）也叫三聯(lián)檢！

預(yù)期用途

兒茶酚胺試劑盒可用于尿液、血漿中腎上腺素/去甲腎上腺素/多巴胺的體外定量檢測。

前言簡介

兒茶酚胺是一類芳香胺的總稱（去甲腎上腺素、腎上腺素、多巴胺以及他們的衍生物），它們分別是一些激素以及神經(jīng)遞質(zhì)。腎上腺素以及去甲腎上腺素是由多巴胺構(gòu)成的。它們作用于心肌、（腎上腺素）以及外周循環(huán)（去甲腎上腺素），并且?guī)椭眢w處理急慢性的壓力。

兒茶酚胺的含量增加可以在嗜鉻系統(tǒng)中出現(xiàn)（嗜鉻細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤）。其含量的上升以及下降也會出現(xiàn)在、退行性、以及中。多巴胺及其衍生物的檢測一般特異性的用于懷疑患有成神經(jīng)細(xì)胞瘤的兒童。

檢測原理

去甲腎上腺素、腎上腺素、多巴胺使用環(huán)已二烯二醇特異性親和凝膠進(jìn)行提取，然后?；蒒-酰基去甲腎上腺素、N-酰基腎上腺素、N-?；喟桶罚缓竺复俎D(zhuǎn)化為N-?；ゼ鬃兡I上腺素、N-?；兡I上腺素、N-酰基-3-甲氧酪胺。

兒茶酚胺試劑盒采用競爭法原理。3塊微孔板上分別包被了腎上腺素、去甲腎上腺素以及多巴胺。樣本中?；膬翰璺影放c微孔板上包被的兒茶酚胺競爭性的同抗血清中固定數(shù)量的結(jié)合位點(diǎn)相結(jié)合。當(dāng)系統(tǒng)達(dá)到平衡態(tài)后，通過洗板除去游離的抗原以及游離的抗原—抗血清復(fù)合物。結(jié)合到酶標(biāo)板上的抗體可以用HRP標(biāo)記的抗兔IgG檢測到。然后HRP與底物TMB反應(yīng)，反應(yīng)可以通過酶標(biāo)儀在450nm下進(jìn)行檢測。所檢測到的抗體與樣本中的兒茶酚胺濃度成反比。

兒茶酚胺試劑盒組成成分

提取板：2×48T，包被有硼酸鹽親和凝膠

提取緩沖液：6ml，即用型

鹽酸：21ml，即用型 含0.025M鹽酸

?；噭?ml，即用型 含二甲亞砜以及DMF

?；彌_液：20ml，即用型

標(biāo)準(zhǔn)品（1-7）：7×4ml，即用型 濃度見下表

	1	2	3	4	5	6	7
腎上腺素    （ng/ml）	0	0.5	1.5	5	15	50	250
nmol/l	0	2.7	8.2	27.3	81.9	273	1365
去甲腎上腺素（ng/ml）	0	1.5	5	15	50	150	500
nmol/l	0	8.9	29.6	88.9	296	887	2955
多巴胺      （ng/ml）	0	1.5	10	40	160	640	2560
nmol/l	0	9.8	65.3	261	1045	4179	16717

檢測尿液時(shí)，不需要使用標(biāo)準(zhǔn)品2；檢測血漿時(shí)，不需要使用標(biāo)準(zhǔn)品7

質(zhì)控品1+2：2×4ml，即用型 具體濃度見質(zhì)控單

酶試劑：3×1.7ml，凍干粉 含兒茶酚胺甲基轉(zhuǎn)移酶

輔酶試劑：1ml，即用型 含S-腺苷甲硫氨酸

酶緩沖液：3.5ml，即用型

抗血清來源：兔

腎上腺素抗血清        2.5ml 即用型 藍(lán)色

去甲腎上腺素抗血清    11ml  即用型 黃色

多巴胺抗血清          5.5ml 即用型 綠色

微孔板：3×96T

腎上腺素藍(lán)色色碼

去甲腎上腺素   黃色色碼

多巴胺   綠色色碼

酶聯(lián)物：12ml，即用型 含HRP標(biāo)記的抗兔IgG

洗滌緩沖液：3×20ml，濃縮型 使用前用蒸餾水稀釋至500ml最終體積

底物液：3×12ml，即用型

終止液：3×12ml，即用型 含0.3M硫酸

貼膜：10片

檢測步驟

腎上腺素

1.每孔加入20ul新鮮配制好的酶混合物（藍(lán)色色碼）

2.移取100ul標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、樣品提取液到相應(yīng)的孔中

3.使用貼膜封板，在室溫下，使用水平旋轉(zhuǎn)振蕩器（400~600r/min）溫育30分鐘

4.每孔加入20ul抗血清

5.封板，搖勻10秒，然后2~8℃下，溫育12~20小時(shí)（過夜反應(yīng)）。

6.棄去孔內(nèi)液體，使用250ul洗滌液洗板4次

7.每孔加入100ul酶聯(lián)物

8.在室溫下，使用水平旋轉(zhuǎn)振蕩器（400~600r/min）溫育30分鐘

9.重復(fù)步驟6

10.每孔加入100ul底物液

11.在室溫下，使用水平旋轉(zhuǎn)振蕩器（400~600r/min）溫育25~35分鐘

12.每孔加入100ul終止液

13.15分鐘內(nèi)，使用酶標(biāo)儀在450nm波長下檢測吸光值

去甲腎上腺素

1.每孔加入20ul新鮮配制好的酶混合物（黃色色碼）

2.移取15ul標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、樣品提取液到相應(yīng)的孔中

3.使用貼膜封板，在室溫下，使用水平旋轉(zhuǎn)振蕩器（400~600r/min）溫育30分鐘

4.每孔加入100ul抗血清

5.封板，搖勻10秒，然后2~8℃下，溫育12~20小時(shí)（過夜反應(yīng)）。

6.棄去孔內(nèi)液體，使用250ul洗滌液洗板4次

7.每孔加入100ul酶聯(lián)物

8.在室溫下，使用水平旋轉(zhuǎn)振蕩器（400~600r/min）溫育30分鐘

9.重復(fù)步驟6

10.每孔加入100ul底物液

11.在室溫下，使用水平旋轉(zhuǎn)振蕩器（400~600r/min）溫育25~35分鐘

12.每孔加入100ul終止液

13.15分鐘內(nèi)，使用酶標(biāo)儀在450nm波長下檢測吸光值

多巴胺

1.每孔加入10ul新鮮配制好的酶混合物（綠色色碼）

2.移取50ul標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、樣品提取液到相應(yīng)的孔中

3.使用貼膜封板，在室溫下，使用水平旋轉(zhuǎn)振蕩器（400~600r/min）溫育30分鐘

4.每孔加入50ul抗血清

5.封板，搖勻10秒，然后2~8℃下，溫育12~20小時(shí)（過夜反應(yīng)）。

6.棄去孔內(nèi)液體，使用250ul洗滌液洗板4次

7.每孔加入100ul酶聯(lián)物

8.在室溫下，使用水平旋轉(zhuǎn)振蕩器（400~600r/min）溫育30分鐘

9.重復(fù)步驟6

10.每孔加入100ul底物液

11.在室溫下，使用水平旋轉(zhuǎn)振蕩器（400~600r/min）溫育25~35分鐘

12.每孔加入100ul終止液

13.15分鐘內(nèi)，使用酶標(biāo)儀在450nm波長下檢測吸光值

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