柱層析硅膠的一般使用方法

  3.1. 稱重。 對(duì)于200-300目硅膠，稱取樣品量的30-70倍； 如果極難區(qū)分，也可以使用100倍量的硅膠H。 干硅膠的表觀密度約為0.4，所以需要稱取40g硅膠，或用燒杯量取100ml。

  3.2. 攪拌成勻漿。 加入兩倍于干燥硅膠體積的溶劑，并用玻璃棒攪拌。 如果洗脫液是石油醚/乙酸乙酯體系，則與石油醚混合。 如果不能攪拌成勻漿，則說明溶劑中的水分含量過高，尤其是乙酸乙酯。 如果分配色譜與水不相容，需要提前用無水硫酸鈉長時(shí)間干燥。無水氯化鈣干燥以除去1%的醇。 如果樣品對(duì)酸敏感，請(qǐng)勿使用系統(tǒng)通過色譜柱。

  3.3. 裝柱。 用棉花代替海砂將柱底擰緊，加入約1/3體積的石油醚，安裝儲(chǔ)液球，打開柱下活塞，將勻漿一次倒入儲(chǔ)液球中。 當(dāng)它沉降時(shí)，會(huì)有一些硅膠粘在儲(chǔ)液球中，用石油醚將其沖入色譜柱。

  3.4. 壓實(shí)。 沉降完成后，再加入石油醚，用雙球或氣泵加壓至流量恒定。 柱床被壓縮到大約 9/10 的體積。 無論是常壓柱還是加壓柱都應(yīng)進(jìn)行此步驟，這樣可以大大提高分離度，并避免在通過柱時(shí)因柱床收縮而開裂。

  3.5. 加載樣本。 干法和濕法都可以使用。 海沙不是一定的。 上樣后，加入一些淋洗液，然后在靠近硅膠表面的地方塞上一大塊脫脂棉。 然后就可以放心的加入大量的淋洗液，而不會(huì)損壞硅膠的表面。

  3.6. 通過和收集。 柱層析實(shí)際上是擴(kuò)散和分離之間的權(quán)衡。 洗脫強(qiáng)度太低不好，推薦梯度洗脫。 收集例：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收集1個(gè)餾分；  1-2g上樣量，50g硅膠（200-300目），20-50ml收集1個(gè)餾分。

  3.7. 檢測(cè)。 需要使用更特殊的噴涂劑。 如果只使用紫外線燈，會(huì)損失更多的產(chǎn)品。 紫外線的靈敏度一般比噴劑低1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。

  3.8. 發(fā)送分?jǐn)?shù)。 收集的產(chǎn)品經(jīng)過旋轉(zhuǎn)干燥，通常需要在發(fā)送光譜之前進(jìn)行重結(jié)晶。 如果樣品太小或呈液態(tài)，可以通過小凝膠柱作為純化方法，然后再發(fā)送光譜。 可以去除氫譜中約1.5 ppm的所謂“硅膠”峰。